壽胎丸對(duì)自然流產(chǎn)患者滋養(yǎng)層細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　自然流產(chǎn)(Spontaneous abortion，SA)是妊娠常見并發(fā)癥，按自然流產(chǎn)發(fā)展的不同階段，可分為先兆流產(chǎn)、難免流產(chǎn)、不全流產(chǎn)、完全流產(chǎn)。對(duì)自然流產(chǎn)患者及時(shí)有效的治療，可進(jìn)一步影響妊娠結(jié)局。故自然流產(chǎn)預(yù)防及治療所展開的研究具有一定的社會(huì)意義。清代醫(yī)家張錫純?cè)凇夺t(yī)學(xué)衷中參西錄》創(chuàng)立的壽胎丸方現(xiàn)廣泛用于自然流產(chǎn)的防治。前期實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)壽胎丸含藥血清呈劑量依賴性地增強(qiáng)自然流產(chǎn)患者滋養(yǎng)層細(xì)胞的增殖活性、侵襲遷移力，減

2、少細(xì)胞凋亡?；诖?，本課題探討壽胎丸含藥血清對(duì)自然流產(chǎn)患者滋養(yǎng)層細(xì)胞凋亡及凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Fas、FasL、Survivin表達(dá)的影響，以期進(jìn)一步探討壽胎丸防治自然流產(chǎn)作用機(jī)制及其作用靶點(diǎn)。
　　方法：
　　1、將36只SPF級(jí)雌性SD大鼠隨機(jī)分為3組，分別予壽胎丸水煎液（6.25g/kg）、地屈孕酮水溶液（2.08mg/kg）、等量生理鹽水灌胃，制備壽胎丸含藥血清、地屈孕酮含藥血清及空白血清。
　　2、體

3、外分離培養(yǎng)正常妊娠人工流產(chǎn)者及難免流產(chǎn)患者滋養(yǎng)層細(xì)胞(Trophoblastic cells，TB)，采用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)貼壁細(xì)胞中細(xì)胞角蛋白（Cytokeratin-7，CK-7）和波形蛋白(Vimentin)表達(dá)，證實(shí)為滋養(yǎng)層細(xì)胞后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　3、不同濃度(5％、10％、20％)壽胎丸含藥血清干預(yù)自然流產(chǎn)患者滋養(yǎng)層細(xì)胞，空白血清及地屈孕酮含藥血清分別作為空白對(duì)照及陽性對(duì)照。
　　4、采用流式細(xì)胞術(shù)(Flow c

4、ytometry,FCM)檢測(cè)各組滋養(yǎng)層細(xì)胞凋亡情況。
　　5、采用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western blot）檢測(cè)各組凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax、Fas、FasL、Survivin表達(dá)的差異并分析其相關(guān)性。
　　6、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以((x)±s)表示。根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的不同采用不同統(tǒng)計(jì)方法，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、與正常對(duì)照組比較，自

5、然流產(chǎn)患者滋養(yǎng)層細(xì)胞早期凋亡、總凋亡比例明顯升高（P＜0.05）。
　　2、與正常對(duì)照組相比，自然流產(chǎn)患者滋養(yǎng)層細(xì)胞Bcl-2、Survivin蛋白表達(dá)量減少，F(xiàn)as、FasL、Bax蛋白表達(dá)量增多(P＜0.01)。
　　3、與空白血清對(duì)照組相比，壽胎丸含藥血清、地屈孕酮含藥血清能降低自然流產(chǎn)患者滋養(yǎng)層細(xì)胞早期凋亡、總凋亡比例(P＜0.01)。
　　4、與空白血清對(duì)照組相比，壽胎丸含藥血清、地屈孕酮含藥血清能上調(diào)Bcl

6、-2、Survivin蛋白水平，下調(diào)Fas、FasL、Bax蛋白水平(P＜0.01)。
　　5、壽胎丸含藥血清對(duì)自然流產(chǎn)患者滋養(yǎng)層細(xì)胞凋亡及凋亡蛋白的影響呈劑量依賴性（P＜0.05）。
　　6、Bcl-2與Survivin存在密切的正相關(guān)關(guān)系，Bax、Fas、FasL與Survivin存在密切的負(fù)相關(guān)關(guān)系（P＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　壽胎丸含藥血清呈劑量依賴性減少自然流產(chǎn)患者滋養(yǎng)層細(xì)胞凋亡，上調(diào)Bcl-2、