精氨酸對(duì)初產(chǎn)母豬繁殖性能及胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、研究表明，在玉米-豆粕型日糧中添加1％精氨酸可提高妊娠母豬的繁殖性能。但在實(shí)際生產(chǎn)中，由于精氨酸的市場(chǎng)價(jià)格較高，添加1％精氨酸成本過(guò)高，未獲得廣泛推廣應(yīng)用。因此，本試驗(yàn)擬采用在小麥-豆粕型飼糧中添加0.1％L-精氨酸鹽酸鹽研究其對(duì)初產(chǎn)母豬產(chǎn)仔性能的影響，并通過(guò)細(xì)胞試驗(yàn)研究精氨酸及其代謝產(chǎn)物對(duì)母豬胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞的影響及其可能機(jī)制，從而為精氨酸在母豬生產(chǎn)中的的科學(xué)合理應(yīng)用提供理論依據(jù)。挑選日齡和體重相近、遺傳背景一致、發(fā)情日期相接近的長(zhǎng)×大

2、初產(chǎn)母豬120頭，根據(jù)體重隨機(jī)分成對(duì)照組和精氨酸組，每組60頭，每重復(fù)一頭母豬。精氨酸組是在妊娠期第30～110天小麥-豆粕型飼糧中添加0.1％L-精氨酸鹽酸鹽，而對(duì)照組飼糧中添加0.17％L-丙氨酸進(jìn)行等氮平衡。試驗(yàn)期間記錄窩產(chǎn)仔數(shù)、活仔數(shù)、仔豬體重和分娩后的胎盤(pán)重，并檢測(cè)母豬妊娠第30、70和90天血漿中游離氨基酸、雌激素、多胺、一氧化氮(NO)、氨、胰島素樣生長(zhǎng)因子-Ⅰ(IGF-1)等生理指標(biāo)。通過(guò)細(xì)胞試驗(yàn)研究不同濃度精氨酸對(duì)母豬

3、胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖影響，在不含精氨酸的特制DMEM培養(yǎng)基(0 mM)的基礎(chǔ)上對(duì)母豬胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行精氨酸饑餓處理6 h后，分別添加不同濃度的精氨酸(0.2、0.4、0.8、1.6、3.2 mM)培養(yǎng)2、4和6天，利用MTT法檢測(cè)母豬胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞增殖，并通過(guò)線粒體膜電位試劑盒檢測(cè)早期凋亡情況，用熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)胞增殖相關(guān)基因表達(dá)，并用ELISA試劑盒檢測(cè)生長(zhǎng)因子和雌激素合成，以及westernblot免疫印跡法對(duì)mTOR信號(hào)通路蛋白

4、表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。選取試驗(yàn)二得到的促進(jìn)母豬胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖的最適精氨酸濃度，采用總一氧化氮合成酶抑制劑(L-NMMA)、多胺合成抑制劑(DFMO)、NO供體硝普鈉和腐胺來(lái)驗(yàn)證NO和腐胺對(duì)母豬胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖和基因表達(dá)的影響。利用MTT法檢測(cè)母豬胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞增殖，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期，采用熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)胞增殖相關(guān)基因表達(dá)，并用ELISA試劑盒檢測(cè)生長(zhǎng)因子的合成，以及western blot免疫印跡法對(duì)mTOR和β-cateni

5、n信號(hào)通路蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴與對(duì)照組相比，在妊娠30～110天初產(chǎn)母豬的小麥-豆粕型飼糧中添加0.1％ L-精氨酸鹽酸鹽，可以顯著提高初產(chǎn)母豬的總產(chǎn)仔數(shù)和產(chǎn)活仔數(shù)(P＜0.05)，其中總產(chǎn)仔數(shù)增加1.1頭(提高11.28％)，產(chǎn)活仔數(shù)增加1.1頭（提高12.64％）;顯著提高妊娠第70天和90天血漿中精氨酸、鳥(niǎo)氨酸和NO濃度（P＜0.05）;顯著提高妊娠第90天血漿中脯氨酸和精胺濃度(P＜0.05);極

6、顯著提高IGF-Ⅰ濃度（P＜0.01）;顯著降低妊娠第90天血漿中血氨的濃度（P＜0.05）。⑵與對(duì)照組(0mM精氨酸)相比，母豬胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞中添加不同濃度精氨酸(0.2、0.4、0.8、1.6和3.2 mM)顯著提高第2、4和6天母豬胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖(P＜0.05)，以0.4 mM效果最佳，并能抑制第2和4天母豬胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞早期凋亡;0.4 mM、0.8 mM和1.6 mM精氨酸顯著提高第4天母豬胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞PCNA mRNA

7、相對(duì)表達(dá)量(P＜0.05);0.4mM和0.8 mM精氨酸顯著提高第4天精氨酸酶mRNA相對(duì)表達(dá)量(P＜0.05);0.4 mM精氨酸顯著提高第2天和第4天母豬胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞培養(yǎng)液中NO、EGF、雌二醇和孕酮濃度（P＜0.05），并提高母豬胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞中mTOR、4EBP-1、RPS6、p-4EBP-1和p-RPS6蛋白表達(dá)(P＜0.05)。⑶與抑制劑添加組相比，添加硝普鈉和腐胺促進(jìn)第2、4、6天母豬胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖;提高第2和4天

8、母豬胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞G2+S期的百分比(P＜0.05);提高第2和4天母豬胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞中PCNA、IGF-Ⅰ、EGF、mTOR、β-catenin的mRNA相對(duì)表達(dá)量(P＜0.05);添加腐胺第2天母豬胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞中mTOR蛋白表達(dá)量顯著升高（P＜0.05）;添加硝普鈉母豬胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞中β-catenin蛋白和p-β-catenin蛋白表達(dá)量顯著升高(P＜0.05);添加硝普鈉和腐胺第4天母豬胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞中mTOR、β-caten