Sonic hedgehog信號通路對胎盤滋養(yǎng)層11β-HSD2表達調控.pdf

1、背景和目的:
　　糖皮質激素(GCs)對促進胎兒器官的發(fā)育成熟有著重要作用，但孕期過度暴露于糖皮質激素，會導致胎兒生長發(fā)育遲緩以及成年后代謝性疾病的發(fā)生率增加。11β-羥基類固醇脫氫酶Ⅱ型(11β-HSD2)是一種糖皮質激素代謝酶，能將有活性的皮質醇代謝為無活性的皮質酮，它主要在胎盤的合體滋養(yǎng)層細胞中表達，起著胎盤糖皮質激素屏障的作用。Sonic Hedgehog(Shh)信號通路對細胞定向分化具有重要作用，并且作為形態(tài)生成素參與

2、了多臟器組織的發(fā)育，如在胚胎發(fā)育中的四肢和大腦的形成。有研究表明，過量糖皮質激素可導致新生胎鼠腦損傷，Shh信號通路通過11β-HSD2降低糖皮質激素引起的新生兒小腦損傷的風險，但Shh只能抑制11β-HSD2敏感的糖皮質激素（可的松、皮質醇、潑尼松）的活性，這提示我們Shh可能參與11β-HSD2活性調節(jié)，然而未見Shh調控11β-HSD2表達的報道。因此，本課題主要研究Shh信號通路對胎盤11β-HSD2表達的調控和分子機制，為胎兒

3、生長受限以及胎源性成年疾病的發(fā)生提供新的理論依據。
　　研究方法:
　　取正常足月妊娠的胎盤組織，即排除孕婦患有妊娠期高血壓、糖尿病、肥胖等，在胎盤娩出后1h內取材，通過percoll密度梯度法分離細胞滋養(yǎng)層細胞。通過熒光素酶報道基因檢測Shh條件培養(yǎng)基的活性;用具有活性的Shh條件性培養(yǎng)基，重組蛋白粉末以及Shh信號通路的特異性抑制劑環(huán)巴胺，Smo受體激動劑Purmorphamine等處理從胎盤中分離出細胞滋養(yǎng)層細胞，通過

4、熒光實時定量PCR和Western Blotting等實驗手段檢測11β-HSD2的mRNA及蛋白表達水平。
　　研究結果:
　　1.Shh條件培養(yǎng)基活性:Gli-熒光素酶報道基因結果顯示，Shh條件性培養(yǎng)基的活性與對照培養(yǎng)基相比明顯增高;用條件性培養(yǎng)基處理細胞滋養(yǎng)層細胞，Gli1的蛋白表達水平升高。
　　2.Shh信號通路途徑對11β-HSD2表達的作用:Shh促進11β-HSD2 mRNA和蛋白水平的表達，環(huán)巴胺可

5、有效抑制Shh信號途徑對11β-HSD2的促進作用。Smo受體激動劑的濃度為10μM時，11β-HSD2的mRNA水平和蛋白水平均顯著增加。通過Gli-shRNA敲降細胞滋養(yǎng)層細胞中的Gli基因，再用Shh條件培養(yǎng)基處理，與對照組相比，Gli-shRNA作用后，11β-HSD2的表達下降。
　　結論:
　　實驗結果表明，制備的Shh條件性培養(yǎng)基具有活性; Shh和膜受體蛋白Smo促進胎盤11β-HSD2的mRNA及蛋白水平的