米非司酮對(duì)人早孕絨毛及蛻膜中骨橋蛋白、絨毛膜促性腺激素-β和P53蛋白表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的：米非司酮(又名RU486)，是一種合成類固醇，其結(jié)構(gòu)類似炔諾酮，具有抗孕酮、抗糖皮質(zhì)激素和輕度抗雄激素特性。其結(jié)合位點(diǎn)是孕激素受體。較早的研究認(rèn)為米非司酮抗早孕的機(jī)制是高濃度孕激素使蛻膜發(fā)生變性、壞死，導(dǎo)致絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞變性、胚胎死亡而終止妊娠。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)米非司酮可直接作用于絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞，使米非司酮的抗早孕機(jī)制更加復(fù)雜。米索前列醇與胚胎死亡無(wú)直接關(guān)系，但可使子宮平滑肌的收縮以排出壞死胚胎組織。米非司酮作為孕激素受體拮抗

2、劑，不僅影響孕酮的生物學(xué)效應(yīng)，對(duì)妊娠及其產(chǎn)物的代謝和形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響也是多方面的。其作用機(jī)制仍在探索之中。 骨橋蛋白(OPN) 是細(xì)胞外基(ECM)中的一種重要的分泌型細(xì)胞因子，它含有精-甘-d冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)序列，其主要的受體為整合素a<,v>B<,3>，二者相互作用共同參與細(xì)胞的聚集、黏附、增殖和遷移及免疫調(diào)節(jié)一系列重要過(guò)程。骨橋蛋白受孕激素調(diào)控，機(jī)體內(nèi)多種組織細(xì)胞均能合成并分泌該因子。研究表明，豬妊娠

3、30d后沿著整個(gè)子宮-胎盤交接面都有OPN蛋白表達(dá)。此外，妊娠期子宮內(nèi)膜致密層內(nèi)的免疫細(xì)胞也有OPN的mRNA和蛋白表達(dá)。因此，推斷OPN表達(dá)于子宮內(nèi)膜上皮和免疫細(xì)胞，與其受體(如整合素)一起作用于孕囊和子宮以促進(jìn)孕囊發(fā)育，在胚泡粘附和胎盤形成中起關(guān)鍵作用。另外OPN與整合素a<,v>B<,3>同時(shí)表達(dá)于滋養(yǎng)層細(xì)胞上，胎盤絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞可分泌OPN，通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞間黏附，誘導(dǎo)細(xì)胞趨化使滋養(yǎng)層遷徙，從而調(diào)節(jié)受精卵的定位、黏附、植入。OPN表

4、達(dá)的不足或過(guò)量可能會(huì)導(dǎo)致疾病，如不明原因的不孕、流產(chǎn)、早產(chǎn)或子宮內(nèi)膜異位癥、滋養(yǎng)層細(xì)胞疾病等。絨毛膜促性腺激素-B (B-HCG)是由胎盤合體滋養(yǎng)層細(xì)胞產(chǎn)生并分泌，是在母體血液中最早可測(cè)到的一種糖蛋白激素，由a，B兩個(gè)鏈組成，其中B-HCG的抗原特異性強(qiáng)，能更精確地反映HCG在人體血、尿中的濃度，測(cè)定血B-HCG值在一定程度上反應(yīng)了胚胎發(fā)育的活力。B-HCG 作為妊娠的特異性標(biāo)志物，其功能是維持早期妊娠黃體的繼續(xù)生長(zhǎng)，刺激黃體產(chǎn)生雌、孕

5、激素，以維持妊娠，直至完全被胎盤取代。血B-HCG的產(chǎn)生與滋養(yǎng)層細(xì)胞的數(shù)量和發(fā)育有關(guān)。Bischof等報(bào)道米非司酮能顯著抑制體外培養(yǎng)的胚胎滋養(yǎng)層產(chǎn)B-HCG和妊娠相關(guān)a血漿蛋白(PAPP-A)，該抑制效應(yīng)能被孕激素(對(duì)PAPP-A 和 B-HCG)和皮質(zhì)醇(對(duì)B-HCG)消除。 P53蛋白最早是在1979年首次被發(fā)現(xiàn)，其分子量53kD，故取名P53。P53是一種同源致癌基因，參與細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)和凋亡的發(fā)生。P53的表達(dá)在調(diào)節(jié)胚

6、胎滋養(yǎng)層的動(dòng)態(tài)平衡中起著不可缺少的作用。米非司酮誘導(dǎo)P53蛋白的上調(diào)可能在母胎界面的凋亡中起著重要作用。P53的另一重要作用是誘導(dǎo)凋亡。P53直接參與細(xì)胞凋亡過(guò)程，主要通過(guò)降低Bcl-2和升高Bax的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)。近年來(lái)有研究發(fā)現(xiàn)，在用米非司酮終止妊娠過(guò)程中，母胎界面相關(guān)細(xì)胞中Bcl-2表達(dá)降低，同時(shí)Bax升高。迄今為止，米非司酮對(duì)早孕絨毛及蛻膜組織的OPN表達(dá)的研究國(guó)內(nèi)外未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)SP法，透射電鏡技術(shù)來(lái)研究米非司酮

7、對(duì)早孕絨毛及蛻膜組織中OPN、B-HCG和P53蛋白表達(dá)的影響，進(jìn)一步探討米非司酮抗早孕的機(jī)制，并為OPN在胚泡著床和胎盤形成過(guò)程中的重要作用提供理論依據(jù)。 方法: 1.取材 (1) 實(shí)驗(yàn)組(米非司酮組)：自愿要求終止妊娠的早孕婦女20例，均為首次服用米非司酮50mg，繼后25mg，每日2次，總量150 mg，于第三d晨8∶00加服米索前列醇60μg，留院觀察，孕囊排出后即刻收集絨毛組織及蛻膜。 (2)

8、對(duì)照組(手術(shù)流產(chǎn)組)：自愿要求終止妊娠的早孕婦女20例，均為行負(fù)壓吸引人工流產(chǎn)術(shù)，術(shù)畢即刻收集絨毛組織及蛻膜。 2.光鏡技術(shù) 應(yīng)用HE染色、免疫組織化學(xué)染色SP法，結(jié)果結(jié)合圖像分析檢測(cè)OPN、B-HCG和P53蛋白表達(dá)情況。 3.電鏡技術(shù) 取米非司酮組和手術(shù)流產(chǎn)組絨毛組織，透射電鏡下觀察非司酮組和手術(shù)流產(chǎn)組的絨毛組織形態(tài)結(jié)構(gòu)。 結(jié)論: 1.OPN表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)和/或細(xì)胞膜上，OPN在早孕絨毛

9、及蛻膜的陽(yáng)性表達(dá)米非司酮組顯著低于手術(shù)流產(chǎn)組，具有顯著性差異。米非司酮藥物流產(chǎn)后，OPN表達(dá)降低，這一結(jié)果提示米非司酮可能抑制了早孕絨毛及蛻膜中OPN的合成，使滋養(yǎng)層細(xì)胞和蛻膜細(xì)胞的黏附、增殖和遷移能力下降，影響了胚泡著床和胎盤的形成，導(dǎo)致流產(chǎn)。 2.B-HCG表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)和/或細(xì)胞膜上。B-HCG在早孕絨毛及蛻膜的陽(yáng)性表達(dá)米非司酮組顯著低于手術(shù)流產(chǎn)組，具有顯著性差異。這一結(jié)果提示米非司酮可能抑制了早孕絨毛及蛻膜中B-HCG的合