胰島素、高血糖素對牛肝細(xì)胞胰島素樣生長因子-ⅠmRNA、PEPCKmRNA豐度的影響和胰島素樣生長因子-Ⅰ對牛肝細(xì)胞PEPCKmRNA豐度的影響.pdf

1、本文通過體外新生牛肝細(xì)胞的單層培養(yǎng)，采用競爭PCR法檢測不同濃度的胰島素、高血糖素對胰島素樣生長因子-Ⅰ的mRNA豐度的影響，同時探討了胰島素、高血糖素和胰島素樣生長因子-Ⅰ對肝臟糖異生關(guān)鍵酶磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)mRNA豐度的影響。在實驗中，首先成功的對目的基因(PEPCK、IGF-Ⅰ、β-actin)進(jìn)行了克隆、PCR條件優(yōu)化并測序，測序結(jié)果與Genbank報道一致。在原代單層培養(yǎng)的新生牛肝細(xì)胞中添加Insulin(I

2、NS)、Glucagon(GN)、IGF-I(Insulin-likegrowthfactorI)，待培養(yǎng)12h后，通過競爭PCR法檢測IGF-ⅠmRNA和PEPCKmRNA的變化規(guī)律。培養(yǎng)液中的各細(xì)胞因子的添加終濃度為：INS(0nmol/ml、1nmol/ml、10nmol/ml、100nmol/ml、1000nmol/ml)，GN(0pg/ml、1pg/ml、20pg/ml、100pg/ml、500pg/ml)，IGF-Ⅰ(0ng

3、/ml、1ng/ml、10ng/ml、15ng/ml、20ng/ml、30ng/ml、40ng/ml、50ng/ml、60ng/ml、100ng/ml、150ng/ml)。實驗結(jié)果：隨INS的濃度的增加，IGF-Ⅰ的mRNA的豐度成上升趨勢，高濃度沒有抑制其表達(dá)，各濃度梯度之間存在顯著性差異(P＜0.01)；隨GN的濃度升高，IGF-Ⅰ的mRNA的豐度成下降趨勢，實驗組IGF-Ⅰ的mRNA的表達(dá)量低于對照組，除低濃度組外的各實驗組與對照

4、組之間相比差異顯著；同時，隨IGF-Ⅰ的濃度的升高，PEPCKmRNA的豐度呈下降趨勢；隨INS的濃度升高，PEPCKmRNA的表達(dá)也成下降趨勢，且在中等濃度(10-100nmol/ml)，PEPCK的mRNA的下降速度最快，各濃度梯度之間差異極顯著；隨GN的添加濃度的升高，PEPCKmRNA的表達(dá)成明顯的上升趨勢，實驗組較對照組的肝細(xì)胞mRNA表達(dá)水平高，各濃度之間差異較顯著(P＜0.01)，且在高濃度(100-500pg/ml)，上