運脾滋腎湯對去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松模型的影響.pdf

1、目的:骨質(zhì)疏松癥(osteoporosis,OP)是以骨量減少,骨的微觀結(jié)構(gòu)退化為特征的,致使骨的脆性增加而易發(fā)生骨折的一種全身性骨骼疾病。其嚴重的并發(fā)癥是脆性骨折,其中最常見的骨折部位是髖部和脊椎。OP已經(jīng)成為世界范圍內(nèi)公眾健康問題,據(jù)統(tǒng)計,2000年全球骨質(zhì)疏松骨折的發(fā)病例數(shù)為900萬,且新增病例數(shù)(特別是髖部骨折例數(shù))隨年齡增長不斷增加,值得注意的是,其中75％的髖部骨折發(fā)生在女性。女性一生當中發(fā)生髖部骨折的危險性大于乳腺癌、子宮

2、內(nèi)膜癌和卵巢癌的危險性的總和,這足以引起我們對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥(postmenopausal osteoprosis,PMOP)的重視。隨著婦女壽命的延長,人們對生活質(zhì)量要求的提高,有關(guān)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的病機及防治的研究已成為熱點。目前已研制出多種己證實有效的藥物,基本上分為骨吸收抑制劑及骨形成促進劑兩大類,中藥治療本病,亦證實有肯定的療效,且副作用小,并兼有維持骨量的作用。補充鈣劑及維生素D制劑在骨質(zhì)疏松的治療是必不可少的,并已肯定可提

3、高其它抗骨疏松藥物的治療效果。激素替代治療(hormone replacementtherapy,HRT)是目前已知療效最確切的抗骨吸收療法,但長期應(yīng)用的風(fēng)險性限制了它的應(yīng)用。雙膦酸鹽作用亦已得到肯定,且只作用于骨,不作用于全身,此種特點有利有弊,降鈣素(calcitonin)是人和動物體內(nèi)調(diào)節(jié)鈣代謝的重要激素之一,它能特異性的直接作用于破骨細胞,減低它的活力和數(shù)量,從而抑制骨吸收,但價格較昂。正如中醫(yī)學(xué)認為骨質(zhì)疏松是機體整體性的失衡衰

4、老的一種表現(xiàn)而已,單一因素的補充療法常難取得最理想的整體療效,且有一定的副作用,而中藥治療是通過對機體的全身性調(diào)節(jié)使機體恢復(fù)平衡狀態(tài)而達到治療骨質(zhì)疏松的目的。中醫(yī)理論認為七七腎氣虛,天癸竭,沖任虛衰引起臟腑功能失調(diào)是造成圍絕經(jīng)期綜合癥的根本原因,治療時補益腎氣調(diào)節(jié)陰陽平衡固然重要,還應(yīng)兼顧脾胃后天之本,脾胃健運,氣血充盈,化源不竭,滋養(yǎng)臟腑功能,使已衰之腎氣得后天精微的充分滋養(yǎng),有望減緩衰勢,建立新的平衡,而且健脾還可加強胃腸道對鈣劑的

5、吸收功能,補腎法治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松具有一定的理論依據(jù),現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn),菟絲子、仙茅、仙靈脾、熟地、麥冬等補腎中藥含有黃酮類物質(zhì),具有植物雌激素的作用特點。本實驗以去卵巢大鼠建立PMOP模型,通過運脾滋腎湯(Yun pizi shen decoction)對去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松的療效觀察及與對照組的比較分析,測定各組大鼠股骨骨密度,血清鈣、磷、堿性磷酸酶、雌二醇、骨鈣素水平等指標,了解運脾滋腎湯對去卵巢大鼠骨丟失的影響及可能的作用機制,為

6、臨床應(yīng)用運脾滋腎湯治療絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松提供證據(jù),并為臨床醫(yī)師針對不同情況的患者而選擇最適宜的藥物治療方案提供參考。進而探討PMOP發(fā)病機制以及為臨床PMOP防治用藥選擇提供實驗依據(jù)。
　　 方法:
　　 1動物分組和PMOP動物模型的建立
　　 3月齡成年雌性Sprague/Dawley大鼠40只,隨機分為4組,每組10只:①假手術(shù)(Sham)組、②卵巢切除(OVX)組、③卵巢切除+尼爾雌醇(OVX+E)組、④

7、卵巢切除+運脾滋腎湯(OVX+Y)組。將大鼠以10％水合氯醛(100mg/kg)腹腔注射麻醉,無菌條件下,經(jīng)腰背部正中縱行切口進入腹腔背側(cè),將②-④組大鼠切除雙側(cè)卵巢,①組大鼠切除雙側(cè)卵巢下方少許脂肪組織,重量約與卵巢相同。于去卵巢術(shù)后7天起,分別對各組大鼠進行灌胃給藥,12周后處死全部大鼠。OVX+E組給予尼爾雌醇1.0mg·kg-1·w-1,OVX+Y組給予運脾滋腎湯(6.5ml/kg),每日1次,Sham組及OVX組分別給予同體積

8、0.9％氯化鈉注射液,每日1次。給藥劑量每周按體重校正1次。
　　 2雙能X線吸收法確立PMOP動物模型
　　 于去勢后12周,分別取各組大鼠置于Osteocore3型雙能X線骨密儀上,通過計算機系統(tǒng)中心動物軟件,測量每只大鼠雙側(cè)股骨骨密度(BMD),取平均值。BMD值用g/cm2表示。
　　 3標本的制備
　　 12周后處死全部大鼠,留取全血后,于低溫超速離心機離心后取血清待檢;稱取大鼠子宮濕重,于大鼠

9、雙角子宮分叉處上方5 mm處取材,常規(guī)石蠟包埋,HE染色,測量子宮內(nèi)膜厚度。并以放免分析法測定血清鈣、磷、堿性磷酸酶、性激素、骨鈣素水平等代謝指標。
　　 4結(jié)果判定與圖像分析統(tǒng)計學(xué)分析實驗結(jié)果應(yīng)用SPSS13.0軟件統(tǒng)計分析。所測數(shù)值均以均數(shù)±標準差((X)±S)表示,方差齊性檢驗采用Levene法,各組間變量比較采用完全隨機的單因素方差分析,并采用SNK法進行兩兩比較;相關(guān)性分析用pearson積差相關(guān)分析。P＜0.05被認

10、為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1試驗前后各組大鼠體重變化
　　 實驗前各組大鼠體重?zé)o明顯差別。實驗12周后,(與)Sham組相比:OVX和OVX-Y組大鼠體重增加(P＜0.05;P＜0.05);OVX+E組大鼠體重差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。與OVX組相比:OVX+E組及OVX+Y組大鼠體重下降(P＜0.05,P＜0.05)。與OVX+E組相比:OVX+Y組大鼠體重?zé)o明顯變化(P＞0.05)。<

11、br>　　 2各組大鼠實驗后子宮/體重指數(shù)和子宮內(nèi)膜厚度的比較
　　 與Sham組相比:OVX組子宮/體重指數(shù)明顯減少、子宮內(nèi)膜明顯變薄(P＜0.05,P＜0.05);OVX+E組子宮/體重指數(shù)明顯增加、子宮內(nèi)膜明顯增厚(P＜0.05,P＜0.05);OVX+Y組則無顯著性差異(P＞0.05,P＞0.05)。與OVX組相比:OVX+E組子宮/體重指數(shù)明顯增加、子宮內(nèi)膜明顯增厚(P＜0.05,P＜0.05);OVX+Y組無顯著性

12、差異(P＞005,P＞0.05)。與OVX+E組相比:OVX+Y組大鼠子宮/體重指數(shù)小,子宮內(nèi)膜厚度薄,差異有顯著性(P＜0.05,P＜0.05)。
　　 3各組大鼠股骨BMD比較
　　 與Sham組相比:OVX組大鼠BMD下降(P＜0.05);OVX+E組大鼠BMD無明顯變化(P＞0.05)。與OVX組相比:OVX+E組及OVX+Y組大鼠BMD明顯增加(P＜0.05;P＜0.05)。與OVX+E組相比:OVX+Y組大鼠

13、BMD無明顯差別(P＞0.05)。
　　 4各組大鼠血清鈣、磷濃度的比較
　　 與Sham組比較,OVX組和OVX+Y組血清鈣、磷濃度明顯減低(P＜0.05)。與OVX組比較,OVX+E組血清鈣、磷濃度明顯升高(P＜0.05),OVX+Y組血清鈣、磷濃度亦升高(P＜0.05)。與OVX+E組相比:OVX+Y組大鼠血清鈣、磷濃度無明顯差別(P＞0.05)。
　　 5各組大鼠血清雌二醇濃度、骨鈣素、堿性磷酸酶的比較<

14、br>　　 與Sham組相比:OVX組和OVX+Y血清雌二醇水平明顯降低(P＜0.05、)。與OVX組相比:OVX+E組和OVX+Y組血清雌二醇水平明顯增加(P＜0.05)。與OVX+E組相比:OVX+Y組大鼠血清鈣、磷濃度無明顯差別(P＞0.05)。
　　 與Sham組相比:OVX+Y與OVX組之間的血清中骨鈣素濃度明顯增加(P＜0.05;P＜0.05)。與OVX組相比:OVX+Y組血清中骨鈣素濃度升高(P＜0.05)。與O

15、VX+E組相比:OVX+Y組血清中骨鈣素濃度升高(P＜0.05)。
　　 與Sham組相比:OVX+Y組和與OVX組血清堿性磷酸酶的活性增加(P＜0.05);與OVX組相比:OVX+Y組堿性磷酸酶活性降低(P＜0.05),OVX+E組血清堿性磷酸酶的活性亦降低(P＜0.05);與OVX+E組相比:OVX+Y組血清堿性磷酸酶的活性升高(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1 PMOP模型建立;
　　 2