慢性扁桃體炎對(duì)機(jī)體免疫功能的影響和機(jī)制研究.pdf

1、本研究分為五部分：
　　 第一部分：慢性扁桃體炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞免疫狀態(tài)和功能變化的研究
　　 目的：探討慢性扁桃體炎對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞免疫狀態(tài)和功能的影響。
　　 方法：分離慢性扁桃體炎組和健康對(duì)照組外周血單個(gè)核細(xì)胞，采用噻唑藍(lán)（MTT）試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期變化和凋亡情況，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的能力，同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞活性狀態(tài)和吞噬功能的變化。
　　

2、 結(jié)果：慢性扁桃體炎組患者外周血單個(gè)核細(xì)胞的增殖能力和細(xì)胞周期與健康對(duì)照組無顯著性差異（P>0.05）；但慢性扁桃體炎組患者外周血單個(gè)核細(xì)胞較健康對(duì)照組凋亡增加（P<0.05），細(xì)胞因子分泌能力增強(qiáng)（P<0.05）而細(xì)胞活性降低且吞噬功能減弱（P<0.05）。
　　 結(jié)論：慢性扁桃體炎影響患者外周血單個(gè)核細(xì)胞的免疫狀態(tài)和功能，能使細(xì)胞凋亡增加，細(xì)胞因子分泌能力異常增強(qiáng)，但同時(shí)使細(xì)胞活性降低且吞噬功能減弱。
　　 第二部分

3、：慢性扁桃體炎患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的分析研究
　　 目的：探討慢性扁桃體炎患者外周血T淋巴細(xì)胞各亞群的變化特點(diǎn)。
　　 方法：采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)54例慢性扁桃體炎患者和52例健康志愿者的外周血初始T細(xì)胞、功能T細(xì)胞、激活T細(xì)胞及凋亡T細(xì)胞亞群百分比，并結(jié)合血清胱抑素(Cystatin C)、ASO和ESR 水平進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果：慢性扁桃體炎患者外周血CD3+T細(xì)胞、CD3+CD8+T細(xì)胞、CD4+

4、CD28+T細(xì)胞、CD8+CD28+T細(xì)胞、CD4+HLA-DR+T細(xì)胞、CD8+HLA-DR+T細(xì)胞、CD8+CD95+T細(xì)胞與健康對(duì)照組相應(yīng)細(xì)胞亞群之間的差異無顯著性意義(P>0.05)。但CD4+T細(xì)胞、CD4+CD45RA+T細(xì)胞和CD4+CD25+T細(xì)胞減少，CD4+CD45RO+T細(xì)胞、CD8+CD38+T細(xì)胞和CD4+CD95+T細(xì)胞增加,CD4+/CD8+和CD4+CD45RA+/CD4+CD45RO+比值下降，與健康對(duì)

5、照組相應(yīng)細(xì)胞亞群之間的差異有顯著性意義(P<0.05)。慢性扁桃體炎患者的外周血CD4+CD45RA+T細(xì)胞百分比與其血清Cystatin C濃度呈負(fù)相關(guān)。
　　 結(jié)論：本研究通過對(duì)外周血各T細(xì)胞亞群變化特點(diǎn)的系統(tǒng)研究，證實(shí)了慢性扁桃體炎患者機(jī)體存在T細(xì)胞免疫平衡紊亂。CD4+CD45RA+T細(xì)胞的變化與慢性扁桃體炎患者腎損害密切相關(guān)。
　　 第三部分：慢性扁桃體炎患者外周血趨化因子表達(dá)變化的研究
　　 目的：研

6、究慢性扁桃體炎患者外周血趨化因子的表達(dá)變化情況，及其趨化因子水平與臨床指標(biāo)之間的關(guān)系。
　　 方法：ELISA法檢測(cè)慢性扁桃體炎組和健康對(duì)照組血清中白細(xì)胞介素-8（interleukin-8，IL-8）、生長(zhǎng)相關(guān)基因產(chǎn)物-α（growth-related gene product-α,GRO-α）、粒細(xì)胞趨化蛋白-2（granulocyte chemotactic protein-2，GCP-2）和單核細(xì)胞趨化蛋白-1（mono

7、cyte chemoattractant protein-1，MCP-1）表達(dá)水平并進(jìn)行比較。探討分析慢性扁桃體炎患者外周血趨化因子水平與抗鏈球菌溶血素O (antistreptolysinO，ASO)、紅細(xì)胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate，ESR）和血清半胱氨酸蛋白酶抑制劑C（Cystatin C）之間的關(guān)系。ROC 曲線分析血清IL-8、GRO-α、GCP-2和MCP-1 診斷慢性扁桃體炎腎損害

8、的參考價(jià)值。
　　 結(jié)果：慢性扁桃體炎組患者外周血血清IL-8、GRO-α和MCP-1表達(dá)水平較健康對(duì)照組高（P<0.05），GCP-2表達(dá)水平在兩組之間無顯著性差異（P>0.05）。慢性扁桃體炎組患者外周血血清IL-8表達(dá)水平與ESR 呈正相關(guān)（r=0.475，P<0.01）并且與血清Cystatin C 水平呈正相關(guān)（r=0.314,P<0.05），MCP-1表達(dá)水平與血清Cystatin C水平呈正相關(guān)（r=0.703，P

9、<0.01）。扁桃體切除術(shù)后一月，慢性扁桃體炎組患者外周血血清IL-8、GRO-α、GCP-2、MCP-1和Cystatin C表達(dá)水平均較術(shù)前有顯著下降（P<0.05）。經(jīng)ROC 曲線分析及檢驗(yàn)比較，MCP-1 診斷腎功能損害的最佳截值為516 pg/ml，敏感性為100%，特異性為82.93%，對(duì)慢性扁桃體炎腎損害診斷有一定的參考價(jià)值。
　　 結(jié)論：慢性扁桃體炎使患者血清趨化因子表達(dá)水平升高，而手術(shù)治療可顯著降低其血清趨化因

10、子表達(dá)水平。其中血清MCP-1表達(dá)水平與腎功能損害相關(guān)，具有一定的診斷參考價(jià)值。
　　 第四部分：慢性扁桃體炎激活外周血單個(gè)核細(xì)胞NF-κB信號(hào)途徑升高單核細(xì)胞趨化蛋白-1表達(dá)的研究
　　 目的：研究慢性扁桃體炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞分泌MCP-1增高的機(jī)制。
　　 方法：分離培養(yǎng)慢性扁桃體炎組和健康對(duì)照組外周血單個(gè)核細(xì)胞，ELISA法檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)上清中MCP-1的表達(dá)，RT-PCR法檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)

11、胞MCP-1 mRNA的表達(dá)，Western Blot檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞胞漿和胞核中IκB、p-IκB、NF-κB的表達(dá)。同時(shí)，給予TNF-α或PDTC，比較上述各指標(biāo)的表達(dá)變化情況。
　　 結(jié)果：慢性扁桃體炎組患者外周血單個(gè)核細(xì)胞分泌MCP-1 較健康對(duì)照組顯著增加（P<0.05）。慢性扁桃體炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞胞漿中IκB表達(dá)減少，p-IκB表達(dá)增加，從而使其NF-κB活化，在胞漿表達(dá)減少，同時(shí)在胞核表達(dá)增加，導(dǎo)致MCP

12、-1 mRNA表達(dá)增加，MCP-1 蛋白產(chǎn)生及分泌增高（P<0.05）。給予TNF-α培養(yǎng)，顯著激活NF-κB信號(hào)途徑，MCP-1 mRNA表達(dá)顯著增加，慢性扁桃體炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞分泌MCP-1 顯著增加（P<0.05）。反之，給予PDTC培養(yǎng)，顯著抑制NF-κB信號(hào)途徑，MCP-1 mRNA表達(dá)顯著減少，慢性扁桃體炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞分泌MCP-1 顯著減少（P<0.05）。
　　 結(jié)論：慢性扁桃體炎患者外周血單個(gè)核細(xì)

13、胞通過活化NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑增加MCP-1的表達(dá)。
　　 第五部分：慢性扁桃體炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞MCP-1受體CCR2的表達(dá)及其相互作用研究
　　 目的：研究慢性扁桃體炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞CCR2表達(dá)情況，以及MCP-1與CCR2的相互作用情況。
　　 方法：分離慢性扁桃體炎組和健康對(duì)照組外周血單個(gè)核細(xì)胞，RT-PCR檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞CCR2 mRNA表達(dá)情況；Western Blot定量檢測(cè)檢測(cè)外

14、周血單個(gè)核細(xì)胞CCR2蛋白水平表達(dá)情況；免疫組化定位CCR2表達(dá)情況；趨化試驗(yàn)檢測(cè)MCP-1與CCR2相互作用情況。
　　 結(jié)果：慢性扁桃體炎組外周血單個(gè)核細(xì)胞CCR2 mRNA和蛋白表達(dá)均較健康對(duì)照組高（P<0.05）。CCR2在慢性扁桃體炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞胞膜上強(qiáng)陽性表達(dá)。MCP-1對(duì)CCR2陽性外周血單個(gè)核細(xì)胞有趨化作用，且呈濃度依賴性增強(qiáng)?？笴CR2抗體能抑制外周血單個(gè)核細(xì)胞的趨化運(yùn)動(dòng)。
　　 結(jié)論：慢性扁桃