SjAWA38kDa和SIEA66-68kDa天然分子抗原的分離純化及其免疫保護(hù)性效果的觀察.pdf

1、研究目的 為了進(jìn)一步研制抗日本血吸蟲病天然分子多價(jià)復(fù)合疫苗，通過(guò)分離純化SjAWA38kDa和SIEA66-68kDa天然分子抗原，對(duì)此進(jìn)行免疫生化特性及其相關(guān)編碼基因的分析，并評(píng)價(jià)其作為抗日本血吸蟲病天然分子候選疫苗的潛在價(jià)值。 研究方法 按本室常規(guī)方法，采用電泳切膠、電洗脫、超濾離心等技術(shù)，分離純化了SjhWh38kDa和SIEA66-68kDa天然分子抗原，免疫新西蘭兔制備單特異抗血清，免疫小鼠進(jìn)行免疫

2、保護(hù)性效果的觀察。同時(shí)，采用SIEA66-68kDa免疫血清作為探針篩選尾蚴eDNA文庫(kù)，篩選相關(guān)的編碼基因。 研究結(jié)果 1．應(yīng)用電泳切膠、電洗脫、超濾離心和凍干等方法分離純化了SjAWA38kDa和SIEA66-68kDa，并達(dá)到電泳級(jí)純度；免疫新西蘭兔，成功制備了高效價(jià)的抗SjAWA38kDa和抗SIEA66-68kDa的單特異免疫血清，抗體效價(jià)高達(dá)l：12800，免疫印跡技術(shù)證明純化后的SjAWA38kDa和SIE

3、A66-68kDa天然分子抗原達(dá)到免疫純級(jí)。 2.采用分離純化的SjAWA38kDa和SIEA66-68kDa免疫小鼠，免疫三次后進(jìn)行尾蚴攻擊感染，觀察其免疫保護(hù)效果。與對(duì)照組比較，SjAWA38kDa免疫組獲得了33.81％的減蟲率，51.72％每雌減卵率和64.80％每克肝臟減卵率。SIEA66—68kDa免疫組達(dá)到41.70％的減蟲率，51.23％每克肝臟減卵率，29.30％雌蟲子宮減卵率，59.26％每克大腸減卵率，45

4、.17％每克糞便減卵率。 3.采用SIEA66-68kDa免疫血清篩選日本血吸蟲尾蚴cDNA文庫(kù)，共篩選出7個(gè)陽(yáng)性克隆，對(duì)陽(yáng)性克隆進(jìn)行PCR擴(kuò)增、測(cè)序，生物信息學(xué)分析，7個(gè)陽(yáng)性克隆分別與日本血吸蟲SJCHGC02468、SJCHGC09789、精氨酸酶、SJCHGC08972、SJCHGC05953、SJCHGC05900和ZZD933mRNA序列高度同源。 結(jié)論 成功分離純化了電泳純及免疫純的SjAWA38kD

5、a和SIEA66-68kDa天然分子抗原，并制備了高效價(jià)、高特異性的單特異免疫血清。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：用SjAWA38kDa和SIEA66-68kDa天然分子抗原分別免疫小鼠，減蟲率分別為33.81％和41.70％，每克肝臟減卵率分別為64.80％和51.23％，均能誘導(dǎo)產(chǎn)生較好的抗日本血吸蟲病免疫保護(hù)力，可以作為抗日本血吸蟲病分子疫苗研究的靶標(biāo)。用SIEA66-68kDa免疫血清篩選日本血吸蟲尾蚴cDNA文庫(kù)，共獲得了7個(gè)相關(guān)基因，其