日本血吸蟲18kDa天然分子抗原及其候選基因疫苗的研究.pdf

1、目的：篩選和鑒定新的有價值的日本血吸蟲疫苗候選分子，為天然分子多價復(fù)合疫苗的制備提供實驗依據(jù)。本論文對日本血吸蟲不同靶分子量大小的天然抗原分子進(jìn)行了分離純化與鑒定，針對SjAWA18kDa分子抗原進(jìn)行免疫生化特性研究，并比較了SjWAwA18kDa天然分子抗原及其相關(guān)編碼候選基因SJCWLOlDNA免疫小鼠產(chǎn)生的抗血吸蟲病免疫保護(hù)效果。 方法：1采用柱層析方法和SDS-PAGE結(jié)合凝膠洗脫分離純化日本血吸蟲成蟲(SjAWA)和未

2、成熟蟲卵可溶性抗原(SIEA)，SDS-PAGE結(jié)合銀染色、考馬斯亮蘭染色進(jìn)行分析鑒定。2采用多途徑免疫法制備SjAWA18kDa純化抗原的單特異免疫血清，以此為探針進(jìn)行免疫學(xué)分析。 3將篩選尾蚴cDNA文庫獲得的新基因(編碼18kDa蛋白，命名為SJCWLOl，GENBANK登錄號為AY855919)克隆入真核表達(dá)載體pcDNA3，經(jīng)PCR、限制性酶切篩選和鑒定陽性克隆。將pcDNA3／SJCWLOl質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5 α、大量

3、制備DNA疫苗；將該天然分子抗原編碼候選基因與SjAWA18kDa免疫小鼠，然后經(jīng)腹部皮膚感染40±l條日本血吸蟲尾蚴，45天后剖殺，計算減蟲率和減卵率。采用免疫組化法檢測重組DNA疫苗SJCWLOl在局部肌肉組織中的表達(dá)。 結(jié)果：l通過柱層析法或SDS-PAGE結(jié)合凝膠洗脫得到了五種不同大小血吸蟲分子抗原SjAWAl8kDa,SjAWA26／28kDa,SIEA42kDa，SIEA130kDa，SjAWA14kDa。2成功制備

4、了抗日本血吸蟲18kDa單特異兔血清，SjAWA18kDa與新基因編碼的重組融合蛋白有共同的抗原表位。免疫組化顯示SjAWA18kDa主要定位于成蟲的腸上皮、表皮和實質(zhì)細(xì)胞。 3將SJCWLOl基因亞克隆至pcDNA3，然后，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，大量制備純化的重組質(zhì)粒DNA(pcDNA3／SJCWLOl)；以此重組DNA和SjAWA18kDa天然分子免疫小鼠，分別獲得了27.6％，30.7％減蟲率，39.5％和50.7％減卵率。免疫組化結(jié)果