日本血吸蟲候選基因疫苗pcDNA3-SjHGPRT的安全性實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本研究旨在通過對注射重組質(zhì)粒DNApcDNA3／SjHrGPRT的家兔局部肌肉刺激試驗(yàn)、豚鼠全身過敏試驗(yàn)、小鼠組織分布及基因整合的研究，對日本血吸蟲候選基因疫苗pcDNA3／SjHGPRT的臨床前安全性進(jìn)行初步研究。 方法 SDS堿裂解法大量提取質(zhì)粒DNA，聚乙二醇法進(jìn)行純化；肌肉注射免疫接種實(shí)驗(yàn)動物；觀察pcDNA3／SjHGPRT。在小鼠注射部位組織及主要臟器的分布；觀察家兔局部肌肉刺激反應(yīng)癥狀，并進(jìn)行組織病理學(xué)檢查；觀察

2、豚鼠免疫接種后過敏反應(yīng)癥狀；質(zhì)粒DNA在組織中的分布采用PCR法檢測。 結(jié)果 1、采用SDS堿裂解法聯(lián)合聚乙二醇純化法，成功大量制備質(zhì)粒pcDNA3／SjHGPRT，純度符合實(shí)驗(yàn)要求，無菌試驗(yàn)陰性。 2、隨機(jī)將小鼠分為3組，實(shí)驗(yàn)組免疫接種劑量為150ug，于免疫接種后12小時、1周、3周、6周分批處死。接種后12小時即可在小鼠血液、心、肝、脾、肺、腎組織及注射部位肌肉中檢測到質(zhì)粒分布，接種后3周仍可在注射部位肌

3、肉組織及個別臟器組織中檢測出，至接種后6周不再檢出。 3、pcDNA3／SjHGPRT肌肉注射后48小時，注射局部肌肉可見小范圍充血出血，肌肉局部刺激輕微，組織病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)局部炎性細(xì)胞浸潤，偶見少量肌細(xì)胞變性壞死。 4、pcDNA3／SjHGPRT豚鼠全身過敏試驗(yàn)顯示，大部分豚鼠未出現(xiàn)過敏反應(yīng)癥狀，個別出現(xiàn)弱陽性過敏反應(yīng)，但短時間內(nèi)即可自行緩解。 結(jié)論 1、采用堿裂解法聯(lián)合聚乙二醇純化法成功大量制備質(zhì)

4、粒DNA，其操作過程較易控制、花費(fèi)較低，經(jīng)多次重復(fù)，效果一致。 2、肌肉注射pcDNA3／SjHGPRT后，可在組織中廣泛分布，持續(xù)分布時間為接種后3周，隨后質(zhì)粒DNA不再被檢出，證明其與小鼠基因組DNA整合危險性極小。 3、家兔肌肉注射pcDNA3／SjHGPRT后，局部刺激輕微，pcDNA3／SjHGPRT可用于肌肉注射；注射局部病檢發(fā)現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤，可能與疫苗接種時機(jī)械損傷及外源抗原誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答有關(guān)。 4