青蒿琥酯對(duì)日本血吸蟲作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、血吸蟲病是嚴(yán)重危害人類健康和影響社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的重大傳染病之一?；熓强刂蒲x病傳播的主要方法之一。青蒿琥酯是我國(guó)開發(fā)的新型抗日本血吸蟲藥物。本文實(shí)驗(yàn)觀察了不同發(fā)育階段日本血吸蟲對(duì)青蒿琥酯的敏感性、青蒿琥酯對(duì)感染宿主體內(nèi)T淋巴細(xì)胞亞群的影響及青蒿琥酯和吡喹酮聯(lián)合用藥治療日本血吸蟲病的效果，旨在為進(jìn)一步探討青蒿琥酯的抗蟲效果和優(yōu)化藥物的使用方案提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 一 體內(nèi)不同發(fā)育階段日本血吸蟲對(duì)青蒿琥酯的敏感性 以定量的日本血

2、吸蟲尾蚴感染小鼠，感染2h、1d、3d、7d、12d、14d、16d、25d、35d和42 d后分別一次性灌服500mg/kg青蒿琥酯，給藥后4周解剖小鼠，采用門靜脈灌注法收集蟲體，計(jì)算減蟲率。結(jié)果：1d、3d、7d、12d、14d、16d、25d、35d和42 d治療組鼠的減蟲率分別為16.9％、18.0％、71.3％、50.2％、36.9％、31.3％、45.3％、58.0％、26.4％。提示青蒿琥酯對(duì)小鼠體內(nèi)1～42d齡的日本血吸

3、蟲均有殺滅作用，但以對(duì)7～35 d齡蟲體殺滅效果更為明顯。 二 體外不同發(fā)育階段日本血吸蟲對(duì)青蒿琥酯的敏感性 將日本血吸蟲尾蚴和毛蚴暴露于不同濃度的青蒿琥酯溶液中，不同時(shí)間后觀察其形態(tài)學(xué)、運(yùn)動(dòng)形式變化及存活率。結(jié)果：當(dāng)尾蚴暴露于20×10-3mol/L青蒿琥酯溶液中，尾蚴頭、體部即刻出現(xiàn)短暫性的劇烈擺動(dòng)，隨后擺動(dòng)速度開始逐漸減慢，頭、體部拉長(zhǎng)伸直由最初的“逗點(diǎn)狀”變成“直線狀”，第5min 100％ 尾蚴沉底死亡；當(dāng)尾蚴

4、暴露于10×10-3mol/L的濃度中，2min、5min、10min和20min后死亡率分別為7.0％、80.9％、94.4％、100％；當(dāng)暴露于5×10-3mol/L的濃度中，2min、5min、10min、20min、40min和60min尾蚴死亡率分別為0、6.2％、10.1％、11.2％、56.2％和95.3％；當(dāng)暴露于10-3mol/L中時(shí)，各時(shí)段尾蚴死亡率分別為0、0、0.5％、2.3％、6.1％和8.7％。 當(dāng)毛

5、蚴暴露于40×10-3mol/L青蒿琥酯溶液中時(shí)，泳動(dòng)速度逐漸減慢，至第5min 100％ 毛蚴沉底死亡；暴露于30×10-3mol/L濃度中5min后，毛蚴死亡率為87.7％，第10min 100％死亡；當(dāng)暴露于20×10-3mol/L濃度中5min、10min、20min、40min和60min死亡率分別為3.8％、23.1％、71.2％、100％和100％；當(dāng)暴露于10×10-3mol/L濃度中5min、10min、20min、4

6、0min和60min，毛蚴死亡率為3.1％、4.6％、6.3％、39.8％和52.6％。提示青蒿琥酯對(duì)日本血吸蟲尾蚴和毛蚴均有不同程度的殺滅作用。 三 青蒿琥酯對(duì)感染宿主T細(xì)胞亞群的影響 以定量日本血吸蟲尾蚴感染小鼠，在小鼠感染后第6d開始每天灌服青蒿琥酯300mg/kg1次，連給6d。于灌藥結(jié)束后1d和1w 、2w、3w 、4w分別經(jīng)鼠尾靜脈采集外周血液標(biāo)本，用流式細(xì)胞儀分別測(cè)定CD4+和CD8+T細(xì)胞數(shù)值，計(jì)算二者比

7、值。 感染鼠在服用青蒿琥酯1d和1w 、2w、3w和4w后CD4+/ CD8+T細(xì)胞比值分別為5.29±1.34、4.45±1.34、2.98±0.80、4.39±0.76和5.48±1.01。認(rèn)為青蒿琥酯可降低感染日本血吸蟲小鼠早期升高的CD4+/ CD8+T細(xì)胞比值，對(duì)感染鼠早期細(xì)胞免疫功能有抑制作用。 四 青蒿琥酯、吡喹酮及聯(lián)合用藥抗日本血吸蟲效果 小鼠定量感染日本血吸蟲尾蚴后分組，分別于不同時(shí)間灌服青蒿琥

8、酯、吡喹酮或分次服用兩種藥物：感染后第7d灌服500mg/kg青蒿琥酯組；感染后第35d灌服500mg/kg青蒿琥酯組；感染后第30d灌服300mg/kg吡喹酮組；感染后第7d和35d分次灌服500mg/kg青蒿琥酯組；感染后第7d灌服青蒿琥酯500mg/kg，第30d再灌服吡喹酮300mg/kg組。各組小鼠于感染后45d解剖，觀察肝臟表面病理變化后，按門脈灌注法收集成蟲計(jì)算減蟲率，采集肝臟和腸組織進(jìn)行消化，計(jì)算減卵率。 1 肝

9、臟表面觀察比較 對(duì)照組鼠肝表面呈暗褐色，質(zhì)地硬，凹凸不平，彌散性分布有乳白色栗粒樣蟲卵結(jié)節(jié)；除有3只鼠肝表面零星分布有蟲卵結(jié)節(jié)外，青蒿琥酯和吡喹酮 7d和30d給藥組鼠肝表面與正常肝臟相似；青蒿琥酯7d和35d給藥組每鼠肝表面均散在分布有蟲卵結(jié)節(jié)，肝臟色澤正常，質(zhì)地軟；吡喹酮30d給藥組變化與青蒿琥酯7d和35d給藥組相似；青蒿琥酯 35d給藥組鼠肝表面蟲卵結(jié)節(jié)較吡喹酮30d給藥組為多；青蒿琥酯 7d給藥組肝臟表面結(jié)節(jié)較多，色澤基本正常

10、，質(zhì)地稍硬。 2 減蟲率 青蒿琥酯 7d和35d給藥組的減蟲率為91.1％；青蒿琥酯和吡喹酮 7d和30d給藥組減蟲率為88.4％；青蒿琥酯 7d給藥組、青蒿琥酯 35d給藥組和吡喹酮 30d給藥組的減蟲率分別為72.2％、58.4％和83.8％。 3 肝減卵率 青蒿琥酯和吡喹酮 7d和30d給藥組肝減卵率為90.7％；青蒿琥酯 7d和35d給藥組為87.6％；青蒿琥酯 7d給藥組、青蒿琥酯35d給藥組和吡喹酮30d給藥