青蒿琥酯抑制丙型肝炎病毒復(fù)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景及目的:丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）感染目前呈全球流行發(fā)展，增加速度非常快。雖然目前的丙肝治療方法已取得非常好的成就，但是由于目前相關(guān)治療方法存在局限性，新的治療丙肝的方法和藥物仍在被開發(fā)中。在本研究中，我們利用JFH1感染的Huh7.5.1、 OR6細(xì)胞模型，探索青蒿琥酯對(duì)丙肝病毒復(fù)制的影響，并與利巴韋林、干擾素抗HCV效果進(jìn)行比較。
　　研究方法:通過MTT方法檢測(cè)JFH1感染的Huh7.5.

2、1及OR6細(xì)胞株的增殖抑制率;HCVRNA熒光定量PCR檢測(cè)HCVRNA;熒光素酶實(shí)驗(yàn)檢測(cè)熒光活性;蛋白印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HCV NS5A蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、青蒿琥酯抑制JFH1細(xì)胞中HCVRNA復(fù)制。第一周青蒿琥酯使HCVRNA下降1～21og10IU/ml;第二周青蒿琥酯使HCVRNA下降2～3個(gè)log10IU/ml;而RBV10ug/ml組2周共下降1log10IU/ml，IFN-a2b500U/ml組第一周下降

3、41og10IU/ml，第二周下降至0。
　　2、青蒿琥酯降低OR6細(xì)胞中海腎熒光素酶活性。將blank組熒光活性定為1，其他組與其校準(zhǔn)，各組熒光活性分別為A12.5umol/L:0.159±0.02; A25umol/L:0.084士0.00;而RBV10ug/ml:0.776±0.01;IFN-a2b500U/ml:0.014±0.00; A12.5umol/l+IFN-a2b500U/ml:0.001士0.00。與blank

4、組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3、青蒿琥酯降低OR6細(xì)胞中NS5A蛋白的表達(dá)。各組NS5A/β-actin相對(duì)灰度比值分別為:blank:1.084±0.074;A12.5umol/L,0.377±0.01; A25umol/L,0.316士0.01;而RBV10ug/ml:0.922士0.10; IFN-a2b500U/ml:0.180士0.00; A12.5umol/1+IFN-a2b500 U/ml:0.1

5、24±0.01。各實(shí)驗(yàn)組與blank組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4、青蒿琥酯上調(diào)HCV5' UTR的活性。各組相對(duì)熒光值分別為:blank:7.510士0.098; A12.5umol/L,28.979±1.595; A25umol/L,49.249±1.502; A37.5umol/L，60.877士1.572而RBV10 ug/ml:7.335±0.095; IFN-a2b500U/ml:2.035士0.0