電針對腦缺血大鼠細胞間粘附分子-1介導腦血管內(nèi)皮細胞凋亡的機制研究.pdf

1、目的腦血管病已成為當今危害人類，特別是中老年人健康的重癥疾病之一。在世界與我國人口老齡化趨勢日益加速的情況下，腦卒中的危害性亦必然日益突出，因此，腦卒中的防治已是目前公共衛(wèi)生領域最受關注的健康問題之一。缺血性卒中的發(fā)病率遠高于出血性卒中。隨著對缺血性腦卒中研究的深入，發(fā)現(xiàn)腦缺血后相當部分的血管能自然再通或溶栓治療后血流恢復再通，但隨之出現(xiàn)再灌注損傷。炎癥反應是造成缺血再灌注后腦損傷的主要原因。炎癥反應的關鍵步驟是白細胞與血管內(nèi)皮細胞粘附

2、、外滲，當內(nèi)皮功能異常時，黏附分子表達過度增加，并從內(nèi)皮表面脫落，以可溶形式存在于血清中并能夠被測定，ICAM-1在腦缺血再灌注損傷中起重要作用。本實驗應用大腦中動脈缺血再灌注模型，觀察電針對ICAM-1介導的腦內(nèi)微血管內(nèi)皮細胞凋亡的信號轉導的影響，探討早期針刺治療抗腦缺血再灌注損傷的機制。 方法采用SD大鼠，隨機分為正常對照組，假手術組，模型組(缺血0.5h再灌注24h)，電針組(缺血0.5h再灌注24h模型加電針)。采用大腦

3、中動脈線栓法制備MCAO缺血再灌注模型，神經(jīng)功能障礙評分參照Zea-Longa評分標準。電針組取百會、水溝穴，采用疏密波，頻率4Hz/16Hz，每次持續(xù)刺激30分鐘。隨相應時相，部分大鼠以10％水合氯醛足量麻醉，采用4℃4％多聚甲醛200ml(含0.1％DEPC)心臟灌注固定，迅速取腦，在視交叉平面前后2mm處將腦冠狀切開，留取中間部分置于4℃4％多聚甲醛固定液中過夜，將固定后的腦組織進行常規(guī)上行脫水、二甲苯透明后石蠟包埋。分別應用HE

4、、TUNEL染色、免疫組化SABC方法觀察腦缺血再灌注后缺血側腦組織的病理學改變、缺血側皮質(zhì)和基底節(jié)腦微血管內(nèi)皮細胞凋亡數(shù)、ICAM-1蛋白、Bcl-2蛋白、c-fos蛋白的表達及電針對其的影響。用計算機圖像分析儀(HPIAS-1000，華中科技大學同濟醫(yī)學院千屏影像公司產(chǎn))對各組TUNEL染色陽性、ICAM-1、Bcl-2、c-fos陽性的微血管計數(shù)分析。隨相應時相，部分大鼠摘除眼球后取血2ml置于室溫下待血液凝固后，4℃3000rp

5、m離心10min，分離血清，以ELISA法檢測血清中sICAM-1的含量；部分大鼠采血后斷頭處死在冰塊上迅速取缺血側腦組織，勻漿，用磷基轉移片法檢測缺血腦組織中PKC的活性。所有數(shù)據(jù)均輸入計算機，以SPSS11.0軟件統(tǒng)計包處理，實驗結果用均數(shù)±標準差表示。 結果(1)電針可明顯改善腦缺血再灌注大鼠的神經(jīng)缺損(p＜0.05)；可明顯減少腦缺血再灌注大鼠缺血側皮質(zhì)和基底節(jié)區(qū)微血管內(nèi)皮細胞的凋亡率(p＜0.05)；可有效改善腦缺血再

6、灌注大鼠缺血側腦組織的病理學改變。 (2)腦缺血再灌注后缺血腦區(qū)微血管內(nèi)皮細胞ICAM-1的表達和外周血中sICAM-1的含量增加(p＜0.01)，電針治療后，缺血腦區(qū)微血管內(nèi)皮細胞ICAM-1的表達和外周血中sICAM-1的含量減少(p＜0.05)。 (3)腦缺血再灌注后缺血腦組織PKC活性增強(p＜0.01)，電針治療后，缺血腦組織PKC活性減弱(p＜0.05)。 (4)腦缺血再灌注后缺血側皮質(zhì)和基底節(jié)區(qū)微血

7、管內(nèi)皮細胞Bcl-2和c-fos蛋白表達均增加(p＜0.01)，電針治療后，缺血側皮質(zhì)和基底節(jié)區(qū)微血管內(nèi)皮細胞Bcl-2蛋白表達增加、c-fos蛋白表達減少(p＜0.05)。 結論ICAM-1、PKC、Bcl-2、c-fos參與了腦缺血再灌注損傷腦血管內(nèi)皮細胞凋亡的發(fā)生過程。電針對腦缺血再灌注損傷細胞間黏附分子-1介導的腦血管內(nèi)皮細胞凋亡的信號轉導具有良性調(diào)節(jié)作用，這一作用可能通過以下途徑實現(xiàn)的：PKC活性降低；同時降低其上游I