血小板微顆粒對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子表達(dá)的影響.pdf

1、近年來(lái)隨著對(duì)血小板微顆粒(Platelet microparticles,PMPs)檢測(cè)技術(shù)的提高,PMPs的臨床意義逐漸受到重視,而有關(guān)PMPs在冠心病心肌缺血與缺血再灌注損傷中的作用也成為研究熱點(diǎn)。大多數(shù)研究表明冠心病心肌缺血與缺血再灌注損傷時(shí),PMPs的水平升高,而其機(jī)制尚未完全清楚。有關(guān)PMPs與細(xì)胞粘附分子(cell adhesion molecular,CAM)的研究甚少,且研究結(jié)果不一致。本實(shí)驗(yàn)用PMPs刺激體外培養(yǎng)的人臍

2、靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(CRL-1730),并測(cè)定內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子E-seleetin、ICAM-1、VCAM-1mRNA的表達(dá),初步研究了PMPs對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞粘附因子表達(dá)的影響,為進(jìn)一步研究PMPs在冠心病中可能的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　 目的:檢測(cè)PMPs作用于內(nèi)皮細(xì)胞后細(xì)胞粘附分子ICAM-1、VCAM-1、E-selectin的表達(dá),探討PMPs在冠心病中的作用。
　　 方法：
　　 1.枸櫞酸鈉抗凝血分離得到血小板

3、微顆粒,并應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其純度。
　　 2.將分離得到的血小板微顆粒與CRL-1730內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)。第一部分根據(jù)加入血小板微顆粒的不同劑量分為五組:0、10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml、100μg/ml,每組均設(shè)4個(gè)復(fù)孔,共培養(yǎng)4小時(shí)后收集各孔中的細(xì)胞。第二部分固定血小板微顆粒的濃度(50μg/ml),根據(jù)共培養(yǎng)的不同時(shí)間分為三組:2小時(shí)、4小時(shí)、24小時(shí),每組均設(shè)4個(gè)復(fù)孔,分別在2小時(shí)、4小時(shí)、24小時(shí)收集

4、各孔中的細(xì)胞。
　　 3.提取內(nèi)皮細(xì)胞中的RNA,應(yīng)用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)擴(kuò)增目的cDNA,測(cè)定目的cDNA擴(kuò)增條帶與內(nèi)參條帶的灰度值。
　　 結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),體外培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞(CRL-1730)在基礎(chǔ)狀態(tài)下即可表達(dá)一定量的E-selectin、ICAM-1和VCAM-1mRNA。加入不同濃度的PMPs刺激之后,當(dāng)PMPS達(dá)到一定濃度,可促使內(nèi)皮細(xì)胞(CRL-1730)表達(dá)E-selectin、ICAM-1和