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文檔簡介
1、目的:
1.探討急性心肌梗死(AMI)患者外周血血小板表面細(xì)胞分化抗原40配體(CD40L)較健康人血小板表面CD40L的水平變化。
2.通過細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)研究體內(nèi)活化血小板CD40L的表達(dá)對內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子及分泌趨化因子的影響。
3.明確CD40L-CD40配體-受體軸在動脈粥樣硬化斑塊局部炎癥反應(yīng)和血栓形成過程中發(fā)揮的調(diào)控作用及其臨床意義。
方法:
1.取20例AMI患者(AMI
2、組)外周血及20例健康人(正常對照組)外周血,根據(jù)AhnadiCE等的方法制備洗滌血小板懸液,應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分別檢測其血小板CD62P和CD40L的表達(dá)。
2.細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),分離AMI患者血小板作為體內(nèi)活化血小板及健康人血小板作為靜息血小板分別與培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)共培養(yǎng),分為以下5個實(shí)驗(yàn)組:①LPS誘導(dǎo)組:LPS(20μg/mL)與HUVECs共同孵育;②體內(nèi)活化血小板誘導(dǎo)組:AMI組洗滌血小板懸液與HU
3、VECs共同孵育;③特異性CD40L單抗誘導(dǎo)組:CD40L單抗(20μg/mL)與AMI組洗滌血小板懸液室溫下作用30min后再與HUVECs共同孵育;④靜息血小板誘導(dǎo)組:正常對照組洗滌血小板懸液與HUVECs共同孵育;⑤未刺激組。各組細(xì)胞在37℃、5%CO2條件下靜止孵育6h。
3.應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)及ELISA法分別檢測以上5個實(shí)驗(yàn)組中HUVECs表達(dá)膜性細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)、E-選擇素(E-selectin)及
4、可溶性白細(xì)胞介素-8(IL-8)的水平變化。
結(jié)果:
1.伴隨CD62P表達(dá)水平的升高AMI組外周血血小板表面CD40L分子表達(dá)也明顯升高,即AMI組血小板CD62P陽性表達(dá)百分率較正常對照組顯著升高[(54.47±9.43)%vs(23.23±6.85)%,P<0.01],同時AMI組血小板CD40L陽性表達(dá)百分率較正常對照組顯著升高[(22.92±5.41)%vs(5.30±3.46)%,P<0.01];AMI組
5、、正常對照組CD40L與CD62P表達(dá)水平之間呈顯著正相關(guān)(r=0.759,P<0.01)。
2.LPS誘導(dǎo)組、體內(nèi)活化血小板誘導(dǎo)組與未刺激組比較,能顯著促進(jìn)HUVECs表達(dá)ICAM-1、E-selectin和IL-8(P均<0.01),而靜息血小板誘導(dǎo)組與未刺激組比較對HUVECs表達(dá)炎性因子無顯著性影響(P>0.05);應(yīng)用特異性CD40L單抗后,體內(nèi)活化血小板對HUVECs的炎性誘導(dǎo)作用受到顯著抑制(P<0.01)。
6、r> 3.血小板表面CD40L的表達(dá)水平與炎癥因子的測值結(jié)果進(jìn)行直線相關(guān)分析表明:CD40L陽性血小板百分率與共培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)炎性因子水平呈顯著正相關(guān)(r=703,P<0.01)。
結(jié)論:
急性心肌梗死患者外周血血小板處于活化狀態(tài),同時可高表達(dá)炎性介質(zhì)CD40L,體外分離這一活化狀態(tài)的血小板可通過CD40L-CD40配體-受體軸誘導(dǎo)共培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子ICAM-1、E-selectin和炎性細(xì)胞趨
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