毛細(xì)管電泳在尿液代謝物分析中的應(yīng)用.pdf

1、毛細(xì)管電泳(Capillary Electrophoresis,CE)作為一項重要的色譜分離技術(shù),具有分離速度快、模式多樣、節(jié)省試劑以及自動化程度高等優(yōu)點,廣泛應(yīng)用于環(huán)境監(jiān)測、生物醫(yī)藥、食品安全等多個領(lǐng)域。尿液中含有大量的人體代謝產(chǎn)物,因此一直被相關(guān)研究者作為解讀病理的重要生理樣本。由于尿液中的5-羥色胺和肌酐具有重要的臨床意義,本文首先采用毛細(xì)管電泳對尿樣中的5-羥色胺和肌酐進(jìn)行同時檢測,通過樣本預(yù)處理/富集以及毛細(xì)管電泳的在線富集作

2、用使檢測靈敏度提高了兩個數(shù)量級。此外,為實現(xiàn)毛細(xì)管電泳與電噴霧質(zhì)譜的聯(lián)用,本文還對可被電噴霧質(zhì)譜兼容的CE分離條件進(jìn)行了考察。主要內(nèi)容如下:
　　 第一章對毛細(xì)管電泳技術(shù)的發(fā)展史、基本原理、分離模式、檢測技術(shù)、在線富集技術(shù)及其在尿樣代謝物分析中的應(yīng)用進(jìn)行綜述,分析了毛細(xì)管電泳應(yīng)用于尿樣代謝物分析的技術(shù)優(yōu)勢以及瓶頸。
　　 第二章通過超聲乳化液相微萃取技術(shù)與毛細(xì)管區(qū)帶電泳在線富集技術(shù)聯(lián)用,對尿樣中的5-羥色胺和肌酐進(jìn)行同時

3、檢測。5-羥色胺作為重要的神經(jīng)遞質(zhì),對人體多項生理功能起著調(diào)節(jié)作用；肌酐是尿樣濃度的校正內(nèi)標(biāo)物,尿液中5-羥色胺和肌酐的相對濃度可以作為5-羥色胺紊亂疾病的診斷依據(jù)。本章實驗在樣本預(yù)處理方面,首先對乳化萃取的有機(jī)相種類、物料相pH及其鹽離子濃度、萃取與反萃時間進(jìn)行了系統(tǒng)地優(yōu)化,并對乳化反萃步驟的萃取效率進(jìn)行了考察,建立了超聲乳化反萃步驟的樣本純化、富集新方法。在毛細(xì)管電泳分離分析方面,對背景緩沖液的pH、濃度以及進(jìn)樣時間進(jìn)行了優(yōu)化,發(fā)現(xiàn)

4、巧妙利用接收相中的酸性基體可以在加大進(jìn)樣量的同時保證CE分離效率,達(dá)到樣品在線富集的效果。將超聲乳化萃取反萃樣品前處理技術(shù)與毛細(xì)管電泳的在線富集技術(shù)有機(jī)結(jié)合,使5-羥色胺的富集效率達(dá)到360倍,檢測限達(dá)到10-8M數(shù)量級,可以對尿樣中生理濃度的5-羥色胺和肌酐進(jìn)行同時檢測。實驗結(jié)果充分證明了該方法準(zhǔn)確、快速(12分鐘左右)、精密度高,可以準(zhǔn)確提供尿樣中5-羥色胺和肌酐的定量信息。
　　 第三章實驗以毛細(xì)管電泳-紫外可見檢測(CE