新型胸苷酸合成酶抑制劑洛拉曲克抗增殖作用的差異及其機(jī)理的研究.pdf

1、盡管目前對(duì)洛拉曲克作用機(jī)理的研究提示其主要作用于TS,但尚無(wú)對(duì)洛拉曲克作用后TSmRNA和蛋白質(zhì)水平的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律進(jìn)行研究,因此該文的目的在于:證實(shí)洛拉曲克在不同細(xì)胞中的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)是否存在差異,研究TSmRNA和蛋白質(zhì)水平在洛拉曲克作用后的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律,以探討洛拉曲克抗增值作用機(jī)理的多樣性.方法:以大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞、小鼠腹水瘤肉瘤SRS-82細(xì)胞、人大腸癌LoVo細(xì)胞、人正常肝臟Lo2細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系.用MTT法確定4株細(xì)胞對(duì)洛拉曲克的

2、敏感性.在細(xì)胞膜水平,以上述三種腫瘤細(xì)胞在不同濃度的洛拉曲克處理不同時(shí)間后以高效液相色譜法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)藥物濃度,比較不同腫瘤細(xì)胞中洛拉曲克跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)有無(wú)差異.在TSmRNA水平,上述4種細(xì)胞在用不同劑量的洛拉曲克處理不同的時(shí)間后提取總RNA,以RT-PCR法檢測(cè)TS和β-actin的mRNA,以TS/β-actin的比率反應(yīng)TS mRNA的動(dòng)態(tài)變化.在蛋白質(zhì)水平,以不同濃度的洛拉曲克處理人LoVo細(xì)胞和Lo2細(xì)胞不同的時(shí)間,分別以流式細(xì)胞法