抗IL-9抗體對(duì)小鼠哮喘模型的作用.pdf

1、目的:盡管大量證據(jù)顯示IL-9和哮喘有關(guān),但未見應(yīng)用IL-9拮抗劑治療哮喘的相關(guān)報(bào)道.該研究將外源性抗IL-9中和抗體應(yīng)用于小鼠哮喘模型,通過(guò)比較不同干預(yù)措施(正常對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、地塞米松組、抗IL-9抗體組)對(duì)小鼠哮喘模型的影響情況,研究抗IL-9抗體對(duì)機(jī)體局部炎癥反應(yīng)的影響以及主要免疫系統(tǒng)中T細(xì)胞功能的影響,旨在進(jìn)一步證實(shí)IL-9在過(guò)敏性哮喘中的作用,了解阻斷IL-9在哮喘中的潛在治療價(jià)值.方法:第一部分:6-8周的雌性BALB

2、/c小鼠共20只,隨機(jī)分為2組:陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組,每組10只小鼠.陽(yáng)性對(duì)照組小鼠在第0、7、14天腹腔注射OVA混懸液致敏.陰性對(duì)照組生理鹽水替代OVA混懸液進(jìn)行腹腔內(nèi)注射.第15~20天所有小鼠一起吸入OVA霧化溶液進(jìn)行激發(fā),每天一次每次20分鐘.末次激發(fā)24小時(shí)后麻醉處死小鼠,眼球取血,全血離心后析出血清,測(cè)血清中的細(xì)胞因子.作支氣管肺泡灌洗液(BALF)的細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞因子檢測(cè),并進(jìn)行肺組織學(xué)檢查.第二部分:6-8周的雌性B

3、ALB/c小鼠共40只,隨機(jī)分為4組:陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、地塞米松組、抗IL-9抗體組.分組后建立小鼠哮喘模型.除陰性對(duì)照組外,其它三組小鼠在第0、7、14天腹腔注射OVA混懸液致敏.陰性對(duì)照組采用生理鹽水替代OVA混懸液進(jìn)行腹腔內(nèi)注射.第15~20天所有小鼠一起吸入OVA霧化溶液進(jìn)行激發(fā),每天一次每次20分鐘,其中地塞米松組和抗IL-9抗體組霧化前進(jìn)行藥物干預(yù).末次激發(fā)24小時(shí)后麻醉處死小鼠,取外周血測(cè)定血清中的細(xì)胞因子;作支氣管

4、肺泡灌洗液(BALF)的細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞因子檢測(cè);并進(jìn)行肺組織學(xué)檢查.第三部分:選取陽(yáng)性無(wú)干預(yù)組、地塞米松組、抗IL-9抗體組三組小鼠.無(wú)菌操作取出脾臟,將其在金屬網(wǎng)上磨碎以制備單細(xì)胞懸液,細(xì)胞調(diào)至2×10<'6>個(gè)/ml,加入OVA作為抗原刺激.無(wú)菌分離出股骨,剪開股骨頭,暴露骨髓腔,用RPMI1640沖洗骨髓腔,制備骨髓細(xì)胞懸液,細(xì)胞調(diào)至2×10<'6>個(gè)/ml.脾細(xì)胞懸液和骨髓細(xì)胞懸液置于5％C02的潮濕環(huán)境中,37℃培養(yǎng)24小時(shí)后