抗DLL4抗體對哮喘小鼠Th17細胞分化的影響.pdf

1、目的：
　　1.研究Deltal樣配體4(Deltal-like ligand4，DLL4)抗體對哮喘小鼠體內(nèi)DLL4-Notch信號通路的阻斷作用。
　　2.闡明阻斷Dll4-Notch信號通路對哮喘小鼠氣道炎癥和哮喘癥狀的改變情況。
　　3.探討哮喘小鼠體內(nèi)阻斷DLL4-Notch信號通路對輔助性T細胞(Th)17分化的影響。
　　方法：
　　將30只4～6周，體重為20±2g的雄性Balb/c小鼠采用

2、隨機數(shù)字表法分為正常照組、生理鹽水組、哮喘模型組、抗Dll4抗體干預組、IgG對照組。模型通過以下方法制備:哮喘組小鼠分別在第1天和第13天通過小鼠腹腔注射0.01％卵清白蛋白(OVA)/氫氧化鋁[Al(OH)3]混合液0.1ml(其中含有OVA10ug和Al(OH)3凝膠20mg)致敏，第25天至第32天連續(xù)8天，每天用1％OVA生理鹽水溶液進行霧化激發(fā)，每次30min，正常對照組代以生理鹽水致敏激發(fā)，生理鹽水組、抗Dll4抗體干預組

3、和IgG對照組每次激發(fā)前半小時分別予以腹腔注射200μ g生理鹽水、抗DLL4抗體、非特異性IgG。制備HE染色切片，以評估各組小鼠肺組織炎癥細胞浸潤、氣道形態(tài)變化情況。肺組織切片進行免疫組織化學染色，采用Image-Pro-Plus6.0軟件分析DLL4光密度(optical density，OD)，半定量分析DLL4的表達。采用Western Blot(WB)法檢測小鼠脾臟分離淋巴細胞中維甲酸相關(guān)孤兒核受體(Retinoid-rel

4、ated orphan nuclear receptor，RORγt)的蛋白表達。采用流式細胞術(shù)(Flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測小鼠脾臟分離淋巴細胞中Th17在CD4+T淋巴細胞中的比例，同時應用酶聯(lián)免疫吸附實驗(enzyme linked immunoadsordent assay，ELISA)檢測各組小鼠血清中白細胞介素-17（Interleukin17，IL-17）的含量。
　　結(jié)果：
　　1.各組小鼠肺組

5、織病理學HE染色的情況
　　生理鹽水組、哮喘模型組、IgG對照組可見大量炎癥性細胞浸潤，正常照組未見炎癥性細胞浸潤，抗DLL4抗體干預組見較少炎癥性細胞浸潤。
　　2.各組小鼠肺組織Dll4的表達情況
　　生理鹽水組、哮喘模型組、IgG對照組DLL4光密度均值與正常對照組比較，均有顯著性差異（P＜0.01），抗體干預組Dll4的OD值與哮喘模型組比較，存在顯著性差異(P＜0.01)。
　　3.各組小鼠脾淋巴細胞T

6、h17細胞在CD4+T淋巴細胞中的比例情況
　　生理鹽水組、哮喘模型組、IgG對照組脾分離淋巴細胞中Th17細胞在CD4+T淋巴細胞中的比例與正常對照組比較均有顯著性差異（P＜0.05），抗體干預組脾分離淋巴細胞中Th17細胞在CD4+T淋巴細胞中的比例與哮喘模型組比較存在顯著性差異（P＜0.05）。
　　4.各組小鼠脾淋巴細胞RORγt的蛋白含量
　　生理鹽水組、哮喘模型組、IgG對照組小鼠脾臟分離淋巴細胞中RORγ

7、t蛋白表達水平與正常對照組比較均有顯著性差異(P＜0.01)，抗體干預組RORγt表達水平與哮喘模型組比較，存在顯著性差異(P＜0.01)。
　　5.各組小鼠血清IL-17含量的情況
　　哮喘模型組、IgG對照組小鼠血清中IL-17水平與正常對照組相比較，存在顯著性差異(P＜0.01)，抗體干預組小鼠血清IL-17的表達與哮喘組相比較存在顯著性差異(P＜0.01)。
　　結(jié)論：
　　1.抗DLL4抗體對哮喘小鼠體