三氯乙烯經(jīng)皮致敏對小鼠Th17細(xì)胞影響的研究.pdf

1、目的：通過檢測和比較不同組別和不同時(shí)點(diǎn)三氯乙烯經(jīng)皮致敏小鼠體內(nèi)Th17細(xì)胞的數(shù)量、其分泌的細(xì)胞因子IL-17和促Th17細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子IL-6表達(dá)情況,探討Th17細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子在TCE致敏中的作用,研究三氯乙烯藥疹樣皮炎皮膚損傷的新機(jī)制。
　　方法：選用6-8周的雌性Balb/c小鼠作為試驗(yàn)對象,經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)5-7天后,選用25g左右的健康小鼠進(jìn)入實(shí)驗(yàn)隊(duì)列,根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?dòng)物隨機(jī)分成空白對照(5只)和TCE實(shí)驗(yàn)組(75只

2、,其中1d組,2d組,3d組,7d組和14d組各15只)。每日稱量小鼠體重,觀察小鼠健康狀態(tài);參考豚鼠最大反應(yīng)試驗(yàn)(Guinea Pig Maximization Test,GPMT)方法建立小鼠的致敏模型;依據(jù)《化學(xué)品毒性鑒定技術(shù)規(guī)范》(衛(wèi)監(jiān)督【2005】272號)觀察和記錄小鼠背部皮膚反應(yīng)情況并對皮膚反應(yīng)進(jìn)行評分,當(dāng)受試動(dòng)物反應(yīng)積分≥1時(shí),判斷為皮膚致敏反應(yīng)陽性,該動(dòng)物即被劃為致敏組,其余則為未致敏組。分別在皮膚激發(fā)后1d、2d、3

3、d、7d和第14d眼靜脈叢采血并制備血清用于ELISA試劑盒檢測血清中IL-17和IL-6細(xì)胞因子的表達(dá)水平,處死動(dòng)物后取脾臟制成細(xì)胞懸液采用流式細(xì)胞術(shù)測定脾細(xì)胞懸液中Th17細(xì)胞的數(shù)量和比例,皮膚組織用于觀察病理和免疫組化實(shí)驗(yàn)測定皮膚組織中IL-17和IL-6的表達(dá)。用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：1.致敏率參考豚鼠最大值試驗(yàn)建立小鼠TCE致敏模型,空白對照組未見到皮膚紅斑或水腫,TCE實(shí)驗(yàn)組小鼠可

4、見到皮膚損傷,本次實(shí)驗(yàn)條件下,小鼠的致敏率為36％;
　　2.皮膚病理空白對照組小鼠皮膚組織中未見粒細(xì)胞浸潤和表皮層增厚等炎癥反應(yīng);致敏組小鼠可見明顯的皮膚炎癥改變,表皮層增厚,真皮、毛囊周圍水腫,壞死,有大量中性粒細(xì)胞、炎細(xì)胞浸潤。
　　3.小鼠脾細(xì)胞懸液Th17細(xì)胞檢測結(jié)果與空白對照組相比,2d致敏組、3d致敏組小鼠Th17細(xì)胞數(shù)量明顯升高,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與1d致敏組相比,2d致敏組和3d致敏組小鼠Th17細(xì)胞數(shù)量

5、也明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與2d致敏組相比,7d致敏組和14d致敏組的細(xì)胞數(shù)量降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與3d致敏組相比,7d致敏組和14d致敏組相比細(xì)胞數(shù)量同樣降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.血清中IL-17檢測結(jié)果1d、2d及3d致敏組血清中IL-17的表達(dá)結(jié)果均高于空白對照組,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與1d致敏組相比,7d致敏組和14d致敏組的表達(dá)水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與2d致敏組相比,2d未致敏組、7d致敏組和14d

6、致敏組血清中IL-17表達(dá)水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與3d致敏組相比,3d未致敏組、7d致敏組和14d致敏組血清中IL-17表達(dá)水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.皮膚組織中IL-17表達(dá)結(jié)果1d、2d及3d致敏組皮膚組織中IL-17的表達(dá)結(jié)果均高于空白對照組,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與1d致敏組相比,3d致敏組和7d致敏組的表達(dá)結(jié)果升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與2d致敏組相比,2d未致敏組的表達(dá)水平明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而3d

7、致敏組的水平上升,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與3d致敏組相比,3d未致敏組和7d致敏組皮膚組織中IL-17的表達(dá)水平降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;7d致敏組與7d未致敏組之間比較,未致敏組表達(dá)水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　6.血清中IL-6檢測結(jié)果與空白對照組相比,1d、2d、3d及1w致敏組小鼠血清中IL-6的表達(dá)水平上升,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與1d致敏組相比,1d未致敏組和2d、3d、1w致敏組小鼠血清IL-6的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與

8、2d致敏組相比,2d未致敏組及3d、1w、2w致敏組的表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與3d致敏組相比,3d未致敏組及2w致敏組IL-6的表達(dá)水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;1w未致敏組和2w致敏組的表達(dá)水平也低于1w致敏組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　7.皮膚組織中IL-6表達(dá)結(jié)果2d、3d及7d致敏組皮膚組織中IL-6的表達(dá)結(jié)果高于空白對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;3d致敏組皮膚組織中IL-6的表達(dá)高于1d致敏組,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與2d致敏

9、組相比較,2d未致敏組和2w致敏組皮膚IL-6的表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與3d致敏組相比較,3d未致敏組及2w未致敏組皮膚組織IL-6表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;1w未致敏組與1w致敏組比較, IL-6的表達(dá)有差異,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：1.TCE對小鼠有致敏作用,在本次試驗(yàn)中,致敏率為36%。
　　2.Th17細(xì)胞及其相關(guān)的細(xì)胞因子IL-17、IL-6等參與TCE皮膚致敏反應(yīng),可能在致敏過程中發(fā)揮作用,并在三氯