飲水?dāng)z入三氯乙烯致小鼠肝臟損傷中PPARs表達(dá)的研究.pdf

1、研究背景：三氯乙烯（trichloroethylene,TCE)是一種工業(yè)上常用的有機(jī)溶劑,廣泛用作金屬表面去污劑。由于被大量應(yīng)用但處置能力有限,TCE已大量進(jìn)入大氣、土壤以及地下水系統(tǒng)成為一種重要的環(huán)境污染物。長(zhǎng)期低劑量暴露于TCE可致肝毒性,同時(shí)可引起機(jī)體免疫系統(tǒng)的失衡。研究表明TCE經(jīng)肝臟代謝后生成具有過(guò)氧化物酶體增殖物(peroxisome proliferator,PP)特性的代謝物,繼而激活PP的受體過(guò)氧化物酶體增殖物活化受

2、體(peroxisome proliferator activated receptors,PPARs),PPARs與許多環(huán)境毒物所致的肝臟毒性及機(jī)體的免疫應(yīng)答存在密切聯(lián)系,但在飲水?dāng)z入TCE所致肝毒性中PPARs的表達(dá)及其作用仍不清楚。
　　目的:本研究通過(guò)檢測(cè)經(jīng)飲水?dāng)z入 TCE后小鼠肝臟損傷情況及肝臟中 PPARs表達(dá),探討TCE暴露引起小鼠肝臟損傷中PPARs的表達(dá)情況以及時(shí)間和劑量效應(yīng)關(guān)系,為闡明環(huán)境TCE暴露危害及其分子

3、機(jī)制,并制定防制對(duì)策提供理論依據(jù)。
　　方法:選取健康狀況良好,體重16～20g的雌性BALB/c小鼠飼養(yǎng)于清潔級(jí)動(dòng)物房,適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分為空白對(duì)照組、溶劑對(duì)照組、2.5 g/L TCE組和5.0 g/L TCE組,TCE用終濃度不超過(guò)1％的DMSO溶解后經(jīng)飲水給予。分別在第2、4、8、12周摘眼球采集外周血,經(jīng)靜置分離上層血清凍存?zhèn)溆?處死動(dòng)物后取肝臟組織凍存?zhèn)溆谩Ｓ萌詣?dòng)生化分析儀檢測(cè)肝臟生化指標(biāo)谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanin

4、e amiotransferase,ALT),取肝臟組織制作蘇木精—伊紅((hematoxylin-eosin staining,HE)染色切片,顯微鏡下觀察評(píng)價(jià)肝臟病理改變,用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)試劑盒檢測(cè)肝臟促炎細(xì)胞因子白介素(interleukin,IL)-1、IL-6和腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α含量;用熒光定

5、量實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real time-polymerase chain reactions,RT-PCR)法檢測(cè)肝臟PPARα、PPARβ和PPARγmRNA表達(dá)情況,用免疫組織化學(xué)法對(duì)肝臟PPARα和PPARγ蛋白進(jìn)行定位。數(shù)據(jù)用Spss17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行錄入和分析。
　　結(jié)果:
　　1一般情況:實(shí)驗(yàn)期間各時(shí)間段各組小鼠一般情況良好,未出現(xiàn)個(gè)體因TCE攝入而死亡的現(xiàn)象,各組小鼠平均飲水量和體重增長(zhǎng)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,各

6、時(shí)間點(diǎn)小鼠肝臟系數(shù)組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2飲水?dāng)z入TCE致小鼠肝損傷情況:在2、4周,2.5 g/L和5.0 g/L TCE組ALT水平較對(duì)照組有所升高(P<0.05,P<0.01),在8、12周,2.5 g/L、5.0 g/L TCE組ALT水平有所下降,但仍高于對(duì)照組,只有5.0 g/l TCE組ALT水平在8周時(shí)顯著高于對(duì)照組(P<0.05,P<0.01);組織病理學(xué)檢查進(jìn)一步顯示TCE染毒小鼠出現(xiàn)肝臟

7、細(xì)胞水腫變性、炎細(xì)胞浸潤(rùn)等不同程度的肝損傷改變,尤其是給予5.0 g/L劑量在4周時(shí)損傷情況最為明顯;對(duì)肝臟促炎因子水平檢測(cè)結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,2.5 g/L和5.0 g/L TCE組肝臟IL-1、IL-6、TNF-α水平均在4周時(shí)達(dá)到最高,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01),在2、8周,5.0 g/L TCE組小鼠肝臟IL-6、TNF-α水平與對(duì)照組比較也明顯升高(P<0.05,P<0.01),在12周時(shí)三種促炎細(xì)

8、胞因子水平均有所下降,但仍高于對(duì)照組;相關(guān)性分析顯示血清 ALT水平與肝臟促炎細(xì)胞因子水平IL-1,IL-6,TNF-α水平存在顯著的正相關(guān)(r=0.615,0.522,0.649,p<0.01)。
　　3肝臟PPARs表達(dá)情況:在4、8、12周,TCE暴露組PPARα mRNA水平顯著升高,且5.0 g/L TCE組上升趨勢(shì)高于2.5 g/L TCE組(P<0.05,P<0.01);TCE暴露對(duì)PPARβmRNA表達(dá)無(wú)顯著影響(

9、P>0.05);在4周時(shí),TCE暴露組PPARγmRNA水平也顯著上調(diào)(P<0.05),在8、12周,5.0 g/L TCE組PPARγmRNA水平高于對(duì)照組(P<0.05,P<0.01)。進(jìn)一步進(jìn)行免疫組化檢測(cè)顯示,PPARα和PPARγ在TCE染毒組小鼠肝臟組織細(xì)胞核中都有表達(dá),且陽(yáng)性細(xì)胞率均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。
　　結(jié)論
　　1經(jīng)飲水?dāng)z入 TCE可致小鼠肝損傷,肝功能指標(biāo) ALT及肝臟中促炎細(xì)胞因子IL-1