三氯乙烯致敏小鼠體內(nèi)Treg細(xì)胞變化的研究.pdf

1、三氯乙烯(Trichloroethylene,TCE)是工業(yè)上廣泛使用的一種有機溶劑,在五金、電子、玩具等行業(yè)作為金屬部件和電子元件的清洗劑、脫脂劑。在我國職業(yè)性三氯乙烯藥疹樣皮炎(ODMLT)的發(fā)病人數(shù)不斷上升,已成為TCE接觸工人健康危害的突出問題。ODMLT的發(fā)病機制,大多觀點認(rèn)為是T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的IV型變態(tài)反應(yīng)。對于ODMLT中炎癥性反應(yīng)的發(fā)生機制方面,多數(shù)學(xué)者進行了大量研究,但有關(guān)TCE免疫性損傷的調(diào)節(jié)機制研究還剛起步。調(diào)節(jié)性

2、T細(xì)胞是一種不同于Th1和Th2的具有免疫抑制功能的T細(xì)胞群,在免疫抑制或免疫耐受過程中發(fā)揮重要作用,主要通過分泌IL-10、TGF-β發(fā)揮抑制作用。
　　目的：
　　通過檢測TCE致敏小鼠脾臟Treg細(xì)胞比例,以及外周血和皮膚組織中抗炎性細(xì)胞因子白細(xì)胞介素(IL-10)、轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)的表達水平,研究CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞在TCE引起的免疫應(yīng)答中動態(tài)變化情況,探討CD4+CD25+Fox

3、p3+Treg細(xì)胞在TCE致敏中的作用,為最終闡明TCE的危害及其機理并制定防治對策提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　選用6~8周健康雌性BALB/c小鼠80只,隨機分成空白對照組、TCE處理組。建立BALB/c小鼠致敏模型,觀察記錄小鼠背部受試部位的皮膚致敏反應(yīng)情況。根據(jù)末次激發(fā)24h后小鼠的致敏結(jié)果以及取材時點的不同(分別于末次激發(fā)后1d、2d、3d、7d、14d采血,無菌取皮膚組織和脾臟),將TCE處理組分為致敏1d組、

4、致敏2d組、致敏3d組、致敏7d組、致敏14d組和未致敏1d組、未致敏2d組、未致敏3d組、未致敏7d組、未致敏14d組。脾臟單個核細(xì)胞懸液用相關(guān)熒光標(biāo)記的抗體染色后采用流式細(xì)胞術(shù)分析。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測各組血清中IL-10、TGF-β水平。免疫組織化學(xué)法檢測皮膚組織中IL-10、TGF-β的表達。
　　結(jié)果：
　　1.致敏率
　　皮膚致敏反應(yīng)試驗中,空白對照組背部皮膚均沒有發(fā)現(xiàn)紅斑和水腫;TCE處理組75只小鼠中

5、有27只出現(xiàn)背部皮膚的紅斑或水腫,致敏率為36％。
　　2.脾臟Treg細(xì)胞的比例
　　末次激發(fā)后,各組小鼠脾臟組織CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞比例:致敏1d組CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞比例較空白對照組升高不明顯;與空白組對照組、致敏1d組相比,致敏2d組和3d組均顯著升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義;致敏3d組比例最高,但與致敏2d組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義;與致敏2d組和3d組比較,致敏7d組和14d

6、組又明顯下降。同時點的比較,致敏2d、3d組分別高于未致敏2d、3d組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3.血清IL-10和TGF-β水平
　　末次激發(fā)后,各組小鼠血清中 IL-10的水平:所有致敏組顯著高于空白對照組; IL-10的水平在致敏組有“先升后降”的趨勢,在末次激發(fā)后3天達到最高,且致敏2d、3d、7d、14d組均高于致敏1d組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。同時點的比較,致敏組IL-10的水平均高于未致敏組,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義,

7、除了未致敏14d組。
　　末次激發(fā)后,各組小鼠血清中TGF-β的水平:致敏1d、2d、3d、14d組顯著高于空白對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義;致敏3d、7d、14d組均低于致敏1d組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義;致敏3d、7d組低于致敏2d組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。同時點的比較,致敏2d組TGF-β的水平均高于未致敏2d組(P<0.05),其他致敏組均高于未致敏組,但是差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　4.皮膚組織IL-10和TGF-β表達
　　

8、末次激發(fā)后,各組小鼠皮膚組織中IL-10的水平:致敏1d、2d、3d組較空白對照組顯著升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義;致敏7d、14d組顯著降低,與致敏1d、2d、3d組比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。同時點的比較,致敏1d、2d、3d組分別高于未致敏1d、2d、3d組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　末次激發(fā)后,各組小鼠皮膚組織中TGF-β的水平:致敏1d、2d、3d、7d組較空白對照組顯著升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義;致敏2d、3d組較致敏1d組升高,

9、差異均有統(tǒng)計學(xué)意義;與致敏3d組比較,致敏7d、14d組下降,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義;致敏14d組降至最低,與致敏7d組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。同時點的比較,致敏1d、2d、7d組分別高于未致敏1d、2d、7d組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1. TCE在一定劑量下能對小鼠致敏,致敏率為36%,TCE對BALB/c小鼠皮膚具有中度致敏作用。
　　2. Treg細(xì)胞及其分泌的IL-10、TGF-β在TCE接觸過敏性