雷帕霉素通過(guò)抑制Th17細(xì)胞分化減輕LPS誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷.pdf

1、研究背景和目的：
　　ALI/ARDS是各種肺內(nèi)外致病因素導(dǎo)致的肺泡上皮細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷進(jìn)而引起的急性、進(jìn)行性缺氧性呼吸衰竭綜合征。是呼吸科的危急重癥，死亡率長(zhǎng)期居高不下。大量炎癥介質(zhì)釋放和中性粒細(xì)胞激活介導(dǎo)的肺組織不同程度損傷被認(rèn)為是發(fā)病的中心環(huán)節(jié)。然而，以抗炎治療為出發(fā)點(diǎn)的多項(xiàng)臨床實(shí)驗(yàn)并未收到預(yù)期中改善 ALI/ARDS患者預(yù)后的結(jié)果。生理情況下，中性粒細(xì)胞主要存在于骨髓中，且半衰期短。ALI/ARDS時(shí)肺組織內(nèi)中性粒細(xì)

2、胞的募集和活化需要趨化因子和促炎因子的持續(xù)驅(qū)動(dòng)。免疫應(yīng)答作為機(jī)體抵御損傷的第一道防線(xiàn)，啟動(dòng)時(shí)間更早，認(rèn)為是觸發(fā)炎癥反應(yīng)的扳機(jī)。Th17細(xì)胞作為適應(yīng)性免疫應(yīng)答的效應(yīng)細(xì)胞，可通過(guò)分泌IL-17等細(xì)胞因子募集和活化中性粒細(xì)胞，其介導(dǎo)的抗炎免疫應(yīng)答可能是 ALI/ARDS等炎性疾病發(fā)生發(fā)展的的初始動(dòng)力和關(guān)鍵環(huán)節(jié)。據(jù)此，本研究擬探討Th17細(xì)胞在A(yíng)LI/ARDS中的活化特點(diǎn)和可能的調(diào)控方式，為 ALI/ARDS的治療尋找新的切入點(diǎn)。
　　方

3、法：
　　1.收集 ARDS患者外周血標(biāo)本和臨床資料，測(cè)定各組患者血漿Th17系細(xì)胞因子IL-17和IL-22的水平。
　　2.分別用野生型小鼠和 IL-17-/-鼠構(gòu)建 ALI動(dòng)物模型，明確 Th17細(xì)胞的活化特點(diǎn)，并比較兩種小鼠肺組織病理學(xué)改變和 BALF炎癥因子表達(dá)等指標(biāo)。
　　3.雷帕霉素干預(yù)野生型小鼠構(gòu)建的ALI動(dòng)物模型，通過(guò)檢測(cè)核轉(zhuǎn)錄因子和相關(guān)蛋白的表達(dá)，探討Th17細(xì)胞的調(diào)控機(jī)制。
　　結(jié)果：

4、>　　1. ARDS患者早期即有外周血IL-17和IL-22顯著增高，且死亡者一直保持著高水平的Th17細(xì)胞系因子分泌。
　　2. IL-17-/-鼠BALF內(nèi)中性粒細(xì)胞數(shù)量減少，MPO水平降低，肺組織炎癥程度減輕。
　　3. ALI模型鼠中，Th17細(xì)胞的誘導(dǎo)性增殖主要發(fā)生在建模后第二天。IL-17在建模后6小時(shí)即有顯著升高，且后期持續(xù)高表達(dá)。IL-22的表達(dá)高于IL-17數(shù)倍，與STAT3形成正反饋環(huán)路。
　　4.

5、雷帕霉素對(duì)急性肺損傷小鼠具有保護(hù)作用。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)表明，這一保護(hù)作用并非通過(guò)增強(qiáng)抑炎力量—促進(jìn)Treg細(xì)胞增殖實(shí)現(xiàn)的。
　　5.遏止 Th17細(xì)胞的分化，抑制 Th17細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答是雷帕霉素發(fā)揮對(duì)ALI小鼠保護(hù)作用的可能機(jī)制。
　　6.雷帕霉素抑制 Th17細(xì)胞分化的機(jī)制可能為：通過(guò)mTORC1-S6K1通路上調(diào) SOCS3抑制 STAT3分子磷酸化和促進(jìn) Gfi1表達(dá)阻止RORγt核轉(zhuǎn)位。
　　結(jié)論：
　　

6、1.Th17系因子在A(yíng)RDS患者表達(dá)上調(diào)；Th17細(xì)胞在A(yíng)LI動(dòng)物模型分化增殖增加；完全剔除IL-17的作用可削弱中性粒細(xì)胞性炎癥。上述結(jié)果揭示Th17細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答參與ALI/ARDS的發(fā)病，是募集中性粒細(xì)胞的動(dòng)力。
　　2.雷帕霉素對(duì)ALI小鼠的保護(hù)作用是通過(guò)削弱 Th17細(xì)胞介導(dǎo)的促炎反應(yīng)，而非增強(qiáng)Treg細(xì)胞介導(dǎo)的抑炎反應(yīng)。
　　3.雷帕霉素調(diào)控 Th17細(xì)胞分化的機(jī)制涉及 mTORC1-S6K1通路介導(dǎo)的核轉(zhuǎn)錄