拓撲替康減輕LPS誘導(dǎo)的巨噬細胞及急性肺損傷小鼠炎癥的研究.pdf

1、背景與目的：
　　急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征(Acute lung injury and acute respiratory distress syndrome，ALI/ARDS)是嚴(yán)重的肺部炎癥和肺泡-毛細血管膜屏障受損，導(dǎo)致雙肺彌漫性水腫和急性呼吸衰竭。ALI/ARDS是典型的臨床重癥，盡管呼吸支持技術(shù)和重癥病人管理技術(shù)不斷發(fā)展，死亡率仍高達30％-50％。研究發(fā)現(xiàn)拓撲異構(gòu)酶1抑制劑對病毒來源的刺激能夠發(fā)揮顯著的抗炎效應(yīng)。

2、然而，拓撲異構(gòu)酶1抑制劑在ALI/ARDS中能否發(fā)揮效應(yīng)仍不可知。
　　材料與方法：
　　LPS(或ORN02)或LPS(或者ORN02)和TPT同時處理細胞后，分別利用熒光定量PCR和ELISA檢測TNF-α、IL-1β轉(zhuǎn)錄和分泌水平。通過肺組織石蠟切片HE染色方法評估ALI小鼠肺組織病理改變，BCA法和ELISA法分別評估肺泡灌洗液中總蛋白濃度和炎癥因子TNF-α、IL-1β濃度。通過芯片檢測TPT干預(yù)LPS刺激THP-

3、1巨噬細胞后差異基因表達。KEGG分析確定TPT干預(yù)后發(fā)生改變的通路。熒光定量PCR和Western Blotting驗證芯片結(jié)果。
　　結(jié)果：
　　0.1μM或0.5μM of TPT顯著抑制LPS或ORN02誘導(dǎo)的THP-1巨噬細胞促炎因子水平。ALI小鼠模型中，與LPS組相比，5mg/kg或10mg/kg TPT能顯著減輕肺損傷病理改變，顯著降低小鼠肺泡灌洗液中總蛋白、TNF-α和IL-1β濃度。芯片結(jié)果發(fā)現(xiàn)與LPS組

4、比較，LPS+TPT組細胞內(nèi)1400個基因下調(diào)，958個基因上調(diào)，一共2358個基因有差異性表達。TPT干預(yù)后可引起細胞內(nèi)5個炎癥相關(guān)通路顯著受抑，包括細胞粘附通路，F(xiàn)cγ受體介導(dǎo)的細胞吞噬信號通路，NF-κB信號通路，TNF信號通路，及NOD樣受體信號通路。芯片結(jié)果驗證發(fā)現(xiàn)和LPS組相比，TPT干預(yù)后NF-κB信號通路相關(guān)蛋白和下游細胞因子表達水平顯著受抑。
　　結(jié)論：
　　發(fā)現(xiàn)拓撲替康能夠減輕LPS誘導(dǎo)的ALI和巨噬細胞