阻斷E-選擇素緩解LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷.pdf

1、E-選擇素是表達(dá)在內(nèi)皮細(xì)胞表面的一種重要的粘附分子。在組織受到損傷或有炎癥反應(yīng)時(shí)，它的表達(dá)上調(diào)。升高的E-選擇素水平對(duì)血流中的白細(xì)胞有強(qiáng)烈的吸引作用，聚集到損傷或炎癥部位的白細(xì)胞釋放各種氧自由基以及炎癥因子，對(duì)入侵的病原體起到了很好的殺傷作用。但是異常表達(dá)的E-選擇素以及過度聚集和激活的白細(xì)胞往往也會(huì)對(duì)正常組織產(chǎn)生嚴(yán)重?fù)p傷。比如由LPS引起的急性肺損傷的發(fā)病就涉及這個(gè)過程。在本工作中我們提出假說--如果可以阻斷E-選擇素這種重要的免疫粘

2、附分子，可以對(duì)急性肺損傷起到顯著的保護(hù)作用。
　　 我們使用LPS作為炎癥刺激劑在小鼠上復(fù)制急性肺損傷的模型，實(shí)驗(yàn)對(duì)象是E-選擇素基因敲出鼠以及野生型對(duì)照小鼠。E-選擇素基因敲出小鼠在造模后的狀態(tài)明顯好于野生型對(duì)照組。12小時(shí)后，用紅外照相機(jī)記錄各組小鼠的皮膚表面溫度。隨后，取小鼠血樣，肺組織樣本，肺泡灌洗液等樣本做進(jìn)一步檢測(cè)：E-選擇素和髓過氧化物酶(MPO)蛋白在肺組織中的表達(dá)，肺組織丙二醛(MDA)含量，血清炎癥因子水平，

3、肺組織干濕比(wet/dry)，病理學(xué)染色等等。結(jié)果發(fā)現(xiàn)LPS造模后，E-選擇素基因敲出小鼠的血清炎癥因子TNF-α、IL-1β明顯低于野生型對(duì)照小鼠，肺泡灌洗液里的白細(xì)胞聚集也明顯較少，MPO蛋白的表達(dá)更少，MDA含量更低，體溫更接近正常。另外生存率實(shí)驗(yàn)表明，LPS作用后的E-選擇素基因敲出小鼠的生存率明顯優(yōu)于野生型小鼠的造模對(duì)照。
　　 隨后我們希望可以通過體外篩選可以找到有效的E-選擇素抑制劑。LPS刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(

4、HUVEC)可以明顯上調(diào)E-選擇素的表達(dá)，但是100uM的西咪替丁在不影響細(xì)胞活力的情況下，對(duì)E選擇素的表達(dá)有顯著的抑制作用。
　　 進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，小鼠口服西咪替丁(200mg/kg)，可以明顯改善LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷。在造模后的12小時(shí)，紅外成像系統(tǒng)表明小鼠的體溫更接近正常，肺水腫(干濕比)指數(shù)明顯低于模型對(duì)照組，血清炎癥因子TNF-α更低，生存率也明顯延長(zhǎng)。
　　 我們得出結(jié)論：阻斷E選擇素可以緩解LPS誘導(dǎo)的