DEHP在小鼠哮喘模型中佐劑作用的分子機(jī)理.pdf

1、鄰苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)是鄰苯二甲酸形成的二酯，具有增強(qiáng)塑料制品柔韌度和拉伸性能的作用即軟化作用，因此常作為增塑劑被廣泛應(yīng)用于塑料工業(yè)中。DEHP與其載體化合物的結(jié)合力不是共價(jià)鍵，容易在生產(chǎn)、使用和廢棄處理過程中被釋放到環(huán)境中。含有DEHP增塑劑的塑料制品在人們的生活中應(yīng)用廣泛，因而DEHP可以通過多種途徑進(jìn)入人體，其中經(jīng)口暴露是DEHP最主要的暴露方式。DEHP對人體健康的危害主要體現(xiàn)在生殖發(fā)育毒性、遺傳毒性、內(nèi)分泌干擾毒性和

2、免疫系統(tǒng)毒性等方面，其中關(guān)于生殖毒性的研究最多，因?yàn)镈EHP是人們熟知的一種具有抗雄性激素作用的化合物，本研究旨在探究DEHP的免疫毒性作用。
　　過去的幾十年中，過敏性炎癥反應(yīng)在世界范圍內(nèi)的發(fā)生率顯著升高，研究者們開始關(guān)注環(huán)境污染物在過敏性炎癥反應(yīng)中的作用。環(huán)境污染物暴露特別是佐劑類物質(zhì)的暴露可能是過敏性疾病增加的原因之一，DEHP正屬于此類污染物。DEHP能對人體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生調(diào)控作用，人群流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示居室內(nèi)DEHP暴露

3、與兒童哮喘、喘息和濕疹的發(fā)生相關(guān);體內(nèi)和體外研究結(jié)果均表明DEHP暴露與過敏性炎癥反應(yīng)的發(fā)生相關(guān)，動(dòng)物模型研究結(jié)果顯示DEHP暴露能加劇過敏原誘導(dǎo)的氣道炎癥反應(yīng)強(qiáng)度，但不能作為過敏原直接誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生過敏反應(yīng)。然而，現(xiàn)有的研究只是發(fā)現(xiàn)DEHP暴露與過敏性炎癥反應(yīng)之間存在關(guān)聯(lián)，即DEHP暴露能對過敏性炎癥反應(yīng)相關(guān)的部分生物學(xué)指標(biāo)產(chǎn)生影響，但DEHP在過敏性炎癥反應(yīng)中發(fā)揮佐劑作用的分子機(jī)理尚不清楚，仍需要更深入的研究?；趧?dòng)物學(xué)研究的結(jié)論:D

4、EHP在過敏性炎癥反應(yīng)如過敏性哮喘或過敏性皮炎的發(fā)生過程中能促進(jìn)抗原物質(zhì)誘導(dǎo)的過敏反應(yīng)，表現(xiàn)出佐劑作用，提出實(shí)驗(yàn)問題:DEHP作為一種“佐劑”物質(zhì)增強(qiáng)過敏性炎癥反應(yīng)的程度，是否需要依賴過敏性炎癥反應(yīng)的某些分子路徑參與介導(dǎo)呢？
　　過敏性哮喘患者體內(nèi)的氧化應(yīng)激水平顯著升高，而機(jī)體內(nèi)氧化還原平衡的破壞能激活對氧化還原敏感的轉(zhuǎn)錄因子核因子κB(NF-κB)，該轉(zhuǎn)錄因子能誘導(dǎo)炎癥因子如胸腺基質(zhì)淋巴生成素(TSLP)、白介素-4（IL-4）

5、和IL-1β等的基因異常表達(dá)，導(dǎo)致過敏性炎癥反應(yīng)。其中，被氧化-還原失衡活化的轉(zhuǎn)錄因子NF-κB向細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)，啟動(dòng)炎癥因子相關(guān)基因的表達(dá);TSLP是參與Th2型免疫應(yīng)答的重要細(xì)胞因子，能促進(jìn)樹突狀細(xì)胞的極化，向Th2細(xì)胞分化，分泌特異性的Th2型細(xì)胞因子和腫瘤壞死因子α(TNF-α)等誘導(dǎo)多種過敏性疾病。本實(shí)驗(yàn)中，在卵清蛋白(OVA)致敏前60min，分別選擇TSLP單克隆抗體、NF-κB特異性拮抗劑吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)

6、和抗氧化劑褪黑素(MT)對TSLP、NF-κB和氧化應(yīng)激反應(yīng)的信號傳遞進(jìn)行阻斷處理，進(jìn)而探究氧化應(yīng)激反應(yīng)、轉(zhuǎn)錄因子NF-κB和TSLP能否作為抑制DEHP佐劑作用的分子靶點(diǎn)。
　　結(jié)果顯示，10mg/kg/day DEHP單獨(dú)暴露不能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生明顯的哮喘樣癥狀;OVA抗原的致敏和霧化激發(fā)成功誘導(dǎo)了BALB/c小鼠的哮喘表征:血清中總免疫球蛋白E(T-IgE)、OVA特異性免疫球蛋白E(OVA-sIgE)和OVA特異性免疫球蛋白G

7、1(OVA-sIgG1)的水平顯著升高(p＜0.01);肺泡灌洗液(BALF)中Th2型細(xì)胞因子的含量、嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)數(shù)目和嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白(ECP)的濃度增加(p＜0.05或p＜0.01);氣道高反應(yīng)性(AHR)升高(p＜0.05或p＜0.01)，出現(xiàn)明顯的氣道皺縮現(xiàn)象。與OVA組小鼠相比，DEHP+OVA組小鼠的氣道過敏性炎癥反應(yīng)進(jìn)一步惡化，表現(xiàn)為:血清中IgE、OVA-slgE和OVA-sIgG1的濃度顯著升高(p＜

8、0.01)、Th2細(xì)胞因子（IL-4、L-5和IL-13）的含量(p＜0.01)、粘液分泌(p＜0.01)和纖維化增生程度(p＜0.01)均顯著升高;另外，與OVA組小鼠相比，DEHP+OVA組小鼠肺組織中的氧化應(yīng)激水平、核因子NF-κB的表達(dá)(p＜0.01)和核轉(zhuǎn)運(yùn)量以及TSLP的含量(p＜0.05)均顯著地增加。
　　拮抗處理后，小鼠氣道過敏性炎癥反應(yīng)的程度明顯改善。與DEHP+OVA組相比，TSLP單克隆抗體處理(anti-

9、TSLP)組、NF-κB的拮抗劑PDTC處理(PDTC)組和抗氧化劑MT處理(MT)組小鼠血清中的T-IgE、OVA-slgE和OVA-sIgG1含量顯著地降低(p＜0.01);細(xì)胞因子IL-4、IL-5、IL-13和TNF-α的分泌顯著地減少(p＜0.05或p＜0.01);肺組織中的ECP含量(p＜0.01)、粘液分泌量(p＜0.01)和纖維化程度(p＜0.05)均顯著地降低;BALF中EOS數(shù)目顯著減少(p＜0.05或p＜0.01)

10、、氣道高反應(yīng)性顯著降低和氣道重塑程度明顯減輕。本實(shí)驗(yàn)中，DEHP+OVA組小鼠經(jīng)OVA致敏與DEHP灌胃聯(lián)合處理，DEHP的聯(lián)合暴露顯著地促進(jìn)OVA抗原致敏誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激水平，使小鼠肺組織中產(chǎn)生過量的活性氧自由基，加劇氧化還原平衡的破壞，轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活化和核轉(zhuǎn)運(yùn)的水平也顯著地升高，導(dǎo)致氣道中炎癥因子TSLP、TNF-α和IL-4等的表達(dá)進(jìn)一步上調(diào)，從而產(chǎn)生更加嚴(yán)重的哮喘樣癥狀。TSLP單克隆抗體、PDTC和MT阻斷處理均能有效地