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文檔簡介
1、為探討HPA與胃癌浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系以及反義HPA、MMP9及正義TIMP1對人胃癌細胞系體外侵襲的影響,本課題首先采用RT-PCR和原位雜交技術(shù)聯(lián)合檢測了胃癌患者新鮮手術(shù)切除標本中HPAmRNA的水平,揭示HPA與胃癌浸潤轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。在此基礎上,選取HPA、MMP9為靶點,采用反義RNA技術(shù),構(gòu)建HPA及MMP9的反義RNA真核表達載體,并同時構(gòu)建與MMP9作用拮抗的HMP1綠色熒光蛋白真核表達載體,然后將3個重組載體分別轉(zhuǎn)染人胃癌B
2、GC823細胞,用熒光倒置顯微鏡觀察TIMP1綠色熒光蛋白的細胞內(nèi)定位;運用流式細胞術(shù)檢測腫瘤細胞細胞周期的變化;運用RT-PCR、Westernblot檢測胃癌細胞HPA、MMP9及TIMP1在mRNA及蛋白水平表達的改變;最后運用Boydenchamber侵襲實驗技術(shù)觀察轉(zhuǎn)染細胞體外侵襲力的改變,從基因、蛋白、細胞周期、細胞定位和腫瘤細胞生物學行為等多個方面深入探討下調(diào)HPA、MMP9的表達及活性對抑制胃癌侵襲的作用,為反義RNA技
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