PKIP在胃癌組織中的低表達(dá)及對(duì)其侵襲力的影響.pdf

1、背景與目的:
　　目前胃癌是最常見(jiàn)的消化系惡性腫瘤之一，在我國(guó)甚至全球范圍內(nèi)都有很高的發(fā)病率和死亡率[1]。而其中大約70％左右的胃癌發(fā)生在資源匱乏的發(fā)展中國(guó)家。由于胃癌的早期癥狀不明顯，在出現(xiàn)臨床征兆時(shí)多已為中晚期，治療效果差。所以降低胃癌死亡的關(guān)鍵因素是早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷和早期治療?，F(xiàn)在，人們通過(guò)研究胃癌的表觀遺傳學(xué)機(jī)制發(fā)現(xiàn)，胃癌發(fā)生發(fā)展和多個(gè)抑癌基因的失活關(guān)系密切[2-5]
　　最近幾年，因?yàn)榘l(fā)現(xiàn)RKIP能夠在多條細(xì)胞

2、信號(hào)傳導(dǎo)通路中發(fā)揮極其重要的功能，尤其是最新研究證實(shí)RKIP具有抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的作用之后[6]，RKIP的研究已成為腫瘤細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域中的一個(gè)新的研究熱點(diǎn)。RKIP是一種高度保守的多功能蛋白，廣泛存在于人體的各個(gè)組織中，人的RKIP定位于12號(hào)染色體q24.22，含4個(gè)外顯子，其轉(zhuǎn)錄的mRNA長(zhǎng)達(dá)1434bp，編碼187個(gè)氨基酸組成的蛋白[7]。RKIP是絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activatedproteinkniase

3、，MAPK)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的自然遏抑物，Yeung等[8]于20世紀(jì)初研究表明人PEBP可以和Raf-1連結(jié)在一塊，進(jìn)而將Raf-1/MEK/ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路阻遏，所以把PEBP命名為RKIP。RKIP除了抑制制Raf-1/MEK/ERK信號(hào)通路，并參與對(duì)G蛋白耦聯(lián)受體信號(hào)通路和核因子κB(nuclearfactorκB，NF-κB)信號(hào)通路的調(diào)控[9][10]。由于這幾條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化以及凋亡等多個(gè)方面具有重要的調(diào)

4、節(jié)作用，不難得出這個(gè)結(jié)論:RKIP與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，與多種腫瘤的不良預(yù)后密切相關(guān)[11]。通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究證明RKIP可以抑制惡性黑色素瘤、乳腺癌、結(jié)直腸癌、肝癌等多種惡性腫瘤轉(zhuǎn)移，而且RKIP下調(diào)或缺失與前列腺癌，乳腺癌和黑色素瘤等多種人類(lèi)惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后有關(guān)[12,13]。然而，RKIP在胃癌(GC)轉(zhuǎn)移中的作用尚未見(jiàn)報(bào)道，因此RKIP與胃癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系仍需要大量的科學(xué)研究去進(jìn)一步探討。本科研小組旨在研究RKI

5、P與胃癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系，以及RKIP表達(dá)水平改變對(duì)GC細(xì)胞體外侵襲能力的影響。
　　材料與方法:
　　1.采集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院胃腸外科自2011年12月至2013年2月手術(shù)切除的胃癌組織極其相對(duì)應(yīng)的癌旁正常組織標(biāo)。所有標(biāo)本病理診斷明確，術(shù)前均未行放、化療及免疫治療且所有患者均知情同意簽字為憑。手術(shù)切除標(biāo)本離體后用4℃的生理鹽水沖洗掉血污，迅速置入無(wú)菌凍存管于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br>　　2.人胃癌細(xì)胞SGC-790

6、1由鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院提供，為中分化胃腺癌細(xì)胞[9]，來(lái)源于56歲女性轉(zhuǎn)移性腺癌的淋巴結(jié)中的癌組織;細(xì)胞在37℃、5％CO2飽和濕度條件下，用含10％FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)。
　　3.應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)及蛋白質(zhì)印跡法(WesternBlot)分別檢測(cè)胃癌組織及相應(yīng)癌旁組織中RKIPmRNA和蛋白的表達(dá)，采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將正義、反義RKIP表達(dá)質(zhì)粒及其相應(yīng)空白載體分別轉(zhuǎn)染SGC-7901細(xì)胞，建立相應(yīng)

7、的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系，并用Westernblot檢測(cè)轉(zhuǎn)染效果。應(yīng)用Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)研究分析RKIP表達(dá)水平改變對(duì)GC細(xì)胞體外侵襲能力的影響。
　　4.所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)都應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)胃癌組織和癌旁組織中的RKIPmRNA灰度值進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)。對(duì)臨床病理因素間的關(guān)系進(jìn)行x2檢驗(yàn)及Fisher確切概率法檢驗(yàn)，以P＜0.05作為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果:
　　1.RKIPmR

8、NA在胃癌組織中的表達(dá)量相對(duì)值為(0.12±0.02)，癌旁組織中的表達(dá)量為(0.48±0.04)，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.562，P＜0.01)。RKIP的表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤大小無(wú)關(guān)，而與患者腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否、腫瘤TNM分期及是否遠(yuǎn)傳轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）。
　　2.RKIP在癌組織中的表達(dá)量(0.08±0.02)明顯低于癌旁正常組織(0.41±0.04)，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.068

9、，P＜0.01)，RKIP的表達(dá)與胃癌組織的分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否及是否遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)，而與患者年齡、性別和腫瘤大小無(wú)關(guān)。
　　3.Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)顯示，上調(diào)RKIP表達(dá)，SGC-7901細(xì)胞的侵襲能力降低，而下調(diào)RKIP表達(dá)后SGC-7901細(xì)胞的侵襲能力明顯提高。
　　結(jié)論:
　　1.RKIPmRNA在胃癌組織中表達(dá)明顯下調(diào)或者表達(dá)缺失，并且與患者性別、年齡、腫瘤大小無(wú)關(guān)，