染色體微陣列分析技術(shù)在頸項透明層增厚胎兒病例中的應用.pdf

1、目的：
　　1、探討全基因組高分辨率染色體微陣列分析技術(shù)（Chromosomal Microarray Analysis，CMA)在染色體核型正常的頸項透明層（nuchal translucency，NT）增厚胎兒病例中的應用價值。
　　2、探討胎兒早孕期 NT增厚與結(jié)構(gòu)畸形之間的相關性。
　　3、探討 CMA技術(shù)在單純性 NT增厚胎兒病例與 NT增厚合并其它結(jié)構(gòu)異常胎兒病例中致病性拷貝數(shù)變異（copy number

2、variants，CNVs）檢出的差異性。
　　4、探討 NT增厚程度與致病性 CNVs之間的關聯(lián)性。
　　5、探討早孕期 NT增厚胎兒病例的臨床產(chǎn)前診斷技術(shù)流程。
　　方法：
　　1、研究對象：本研究為回顧性研究，選取2012年1月至2013年1月在廣州市婦女兒童醫(yī)療中心產(chǎn)前診斷中心門診行早孕期（11+0—13+6周）唐氏一站式篩查提示胎兒 NT≥3.5mm或3.0mm≤NT＜3.5mm且唐氏篩查高風險（切割值

3、為1:270）的孕婦行侵入性產(chǎn)前診斷后的胎兒樣本（均為單胎）。
　　2、全部胎兒病例事先均行常規(guī) G顯帶染色體核型分析，核型結(jié)果正常者進一步行 CMA檢測。
　　3、使用Qiagen DNA提取試劑盒提取胎兒樣本（絨毛或羊水）的基因組 DNA并使用NanoDrop分光光度計對 DNA的濃度和純度進行測量。
　　4、根據(jù)美國 Affymetrix公司 CytoScan HD芯片平臺(包含195萬拷貝數(shù)探針和75萬單核苷酸

4、多態(tài)性探針)的標準實驗操作流程對樣本 DNA進行處理。
　　5、使用配套的 CHAS軟件對芯片掃描后的文件進行信息轉(zhuǎn)換和數(shù)據(jù)分析。
　　6、參照本實驗室的內(nèi)部數(shù)據(jù)庫、相關國際公共數(shù)據(jù)庫、同行實驗室數(shù)據(jù)庫以及結(jié)合家系綜合分析等手段對 CMA檢測結(jié)果進行比對分析，判斷 CNVs的性質(zhì)。
　　7、通過醫(yī)院內(nèi)部臨床信息登記系統(tǒng)及電話隨訪的方式，追蹤了解胎兒中孕期結(jié)構(gòu)篩查結(jié)果、妊娠結(jié)局及出生后精神運動發(fā)育情況等臨床資料。

5、　　8、采用統(tǒng)計學軟件 SPSS13.0中的χ2檢驗比較單純性 NT增厚病例組與 NT增厚合并其他結(jié)構(gòu)畸形病例組的致病性檢出率的差異性，定義 P＜0.05時差異具有統(tǒng)計學意義；采用非參數(shù) t檢驗比較檢出致病性 CNVs病例組與未檢出致病性 CNVs病例組的 NT值均數(shù)的差異性，定義 P＜0.05時差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果：
　　1、一共有149例胎兒的 NT厚度≥3mm，NT值大小范圍為3.0—8.1mm。其中97例因

6、 NT≥3.5mm或 NT介于3.0-3.5mm之間但唐氏高風險而行侵入性產(chǎn)前診斷，其他52例胎兒因唐氏低風險而未行侵入性產(chǎn)前診斷。
　　2、97例胎兒病例中，19例胎兒有染色體異常，染色體異常的發(fā)生率為19.6％（19/97），其中染色體數(shù)目異常占84.2%(16/19)，染色體結(jié)構(gòu)異常占15.8%(3/19)；其他78例胎兒染色體核型正常。
　　3、78例染色體核型正常胎兒中，11例胎兒在中孕期超聲檢查提示發(fā)生結(jié)構(gòu)異常，

7、結(jié)構(gòu)異常發(fā)生率為14.1%（其中3例多發(fā)畸形，3例心臟畸形，2例唇腭裂，1例腦積水，1例巨大膀胱，1例腹壁囊腫）；其余67例(85.9%)中孕期超聲結(jié)構(gòu)篩查未發(fā)現(xiàn)異常。
　　4、78例染色體核型正常胎兒中，8例胎兒因中孕期結(jié)構(gòu)異常而終止妊娠，1例胎死宮內(nèi)（原因未知），其余69例胎兒均活產(chǎn)。69例活產(chǎn)兒中，7例因電話失聯(lián)而沒有獲得隨訪信息；62例成功獲得臨床資料，隨訪成功率為89.9%。5、成功隨訪的62例胎兒病例中，隨訪時間范圍為

8、出生后1天—15個月。其中3例出生后有先天性結(jié)構(gòu)異常（與中孕期超聲診斷一致，2例唇腭裂，1例腹壁囊腫）；3例有不同程度精神運動發(fā)育遲緩；1例有自閉癥；1例出生后24小時死亡(極低出生體重兒，急性呼吸窘迫綜合征)；其余54例未發(fā)現(xiàn)異常。
　　6、 CMA在78例胎兒樣本中均檢測到 CNVs，CNVs的檢出率為100%（78/78）。其中在6例胎兒中檢出明確致病性 CNVs，致病性 CNVs的檢出率為7.7%。在2例（2.6%）胎兒中

9、檢出臨床意義不明確 CNVs（variants of unknown significance,VOUS），在70例（89.7%）胎兒中檢出良性 CNVs。
　　7、在6例檢出明確致病性 CNVs的胎兒病例中，5例只檢出一種致病性 CNVs，分別為5p13.2微重復（0.52Mb）、22q11.21微缺失（3.17Mb）、7p15.3微重復（0.41Mb）、20p12.1微缺失（0.46Mb）和16p13.3微缺失（1.56Mb）

10、；其余1例中檢出2種致病性 CNVs，分別為4p16.3微缺失（3.05Mb）和11p15.4-p15.5微重復（3.18Mb）。
　　8、 CMA起初在5例胎兒中檢出 VOUS，通過進一步對其父母樣本行 CMA檢測，結(jié)果顯示3例胎兒 VOUS是遺傳自表型正常的父母之一，因此判定為良性CNVs；其余2例為新發(fā)，為真正的 VOUS，分別為8q21.11-q21.12微重復（1.07Mb）、5q12.1微缺失（0.23Mb）。因此，真

11、正 VOUS檢出率為2.6%（2/78）。
　　9、 CMA在70例(89.7%)胎兒中檢出良性 CNVs，其中最常見的良性 CNVs有5種（P≥5%，P值=檢出某 CNVs的片段數(shù)量占本研究中檢出的良性 CNVs總量的百分比），分別為14q32.33微重復（18.1%）、8p11.2微缺失/微重復（9.7%）、22q11.22微重復（8.9%）、4q13.2微缺失/微重復（7.8%）、16p11.2微缺失/微重復（5.6%）。3

12、例胎兒檢出的 CNVs遺傳自表型正常的父母之一，因此考慮為良性。3例胎兒中均檢出10p12.33微缺失（0.12Mb），該片段在 DGV及DECIPHER等國際數(shù)據(jù)庫中未見報道，但其內(nèi)不含任何 OMIM基因，因此考慮其為良性。
　　10、單純性 NT增厚胎兒病例組與 NT增厚合并其他結(jié)構(gòu)異常胎兒病例組致病性 CNVs的檢出率分別為6.0%(4/67)和18.2%(2/11)（P=0.198，F(xiàn)isher’s檢驗），兩組間無統(tǒng)計學差

13、異。檢出致病性 CNVs胎兒病例組與未檢出致病性CNVs胎兒病例組 NT值的平均數(shù)分別是4.5mm和4.2mm（P=0.735，Mann-Whitney檢驗)，兩組間無統(tǒng)計學差異。
　　結(jié)論：
　　1、染色體異常是導致胎兒早孕期 NT增厚的常見遺傳學原因。
　　2、 CMA技術(shù)在染色體核型正常的 NT增厚胎兒中具有重要應用價值，可將致病性 CNVs的檢出率額外提高7.7%。
　　3、早孕期 NT增厚的胎兒病例發(fā)生