尿酸下調(diào)人骨髓間充質(zhì)干細胞體外誘導(dǎo)為成骨細胞過程中11β-HSD1的表達.pdf

1、目的:探討在體外誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細胞(hBMSCs)向成骨細胞分化過程中，尿酸對hBMSCs的成骨能力以及尿酸對11β-羥化類固醇脫氫酶1(11β-HSD1)表達及其功能的影響。方法:全骨髓體外分離培養(yǎng)健康成年人骨髓間充質(zhì)干細胞，利用細胞形態(tài)學(xué)及細胞表面標志物對其進行鑒定，培養(yǎng)hBMSCs至第三代后分別以完全培養(yǎng)基（含體積分數(shù)10％的FBS、1％的雙抗、89％的低糖DMEM）為空白對照組、以成骨培養(yǎng)基（含10-8mol/L地塞米松、5

2、0mg/L維生素C、10-2mol/Lβ-甘油磷酸鈉的完全培養(yǎng)基），和尿酸干預(yù)成骨培養(yǎng)基（分別含0.2、0.4、0.8 mmol/L尿酸的成骨培養(yǎng)基）為條件對照組對細胞進行培養(yǎng)和誘導(dǎo)。培養(yǎng)誘導(dǎo)14天后，倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)，堿性磷酸酶染色和茜素紅染色進行成骨細胞鑒定，11β-HSD1免疫細胞化學(xué)染色、RT-PCR技術(shù)檢測各組中11β-HSD1 mRNA表達。結(jié)果:(1)分離培養(yǎng)的細胞表面標志物CD44表達陽性，CD34表達陰性，實驗獲

3、得了高純度hBMSCs。(2)成骨培養(yǎng)基和各尿酸干預(yù)成骨培養(yǎng)基誘導(dǎo)的細胞其堿性磷酸酶染色和茜素紅染色均為陽性且隨著尿酸濃度增高鈣結(jié)節(jié)數(shù)量逐漸增多(P＜0.05)(3)免疫細胞化學(xué)染色技術(shù):各組細胞的細胞漿里都有棕黃色陽性染色顆粒，病理圖象分析軟件測定11β-HSD1含量（以光密度值表示），隨尿酸濃度增高、成骨能力增加光密度值逐漸減少(P＜0.05)(4) RT-PCR技術(shù)結(jié)果:各組都有11β-HSD1 mRNA表達，隨尿酸濃度增高、成骨