氯氮平代謝產(chǎn)物分析方法開發(fā)及其在大鼠和人肝微粒體中的代謝產(chǎn)物研究.pdf

1、近年來，藥物代謝分析經(jīng)過快速的發(fā)展已經(jīng)成為藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究中的一個(gè)重要部分，而不斷完善的液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)被廣泛的應(yīng)用于藥物代謝分析的研究中。相比于傳統(tǒng)的液相色譜技術(shù)，具有高靈敏度、高通量和高準(zhǔn)確性的優(yōu)點(diǎn)。本論文旨在建立新型靈敏、高通量、高準(zhǔn)確性的藥物代謝產(chǎn)物分析方法，并用于分析氯氮平在人和大鼠肝微粒體中的代謝產(chǎn)物。同時(shí)，對于催化氯氮平產(chǎn)生主要代謝產(chǎn)物的CYP酶進(jìn)行了更進(jìn)一步的研究。
　　本論文第一章概述了藥物代謝及其分析方法的發(fā)展概

2、況，回顧了現(xiàn)有的MRM和MIM的檢測方法，隨后討論了MRM和MIM方法在檢測藥物代謝產(chǎn)物中的應(yīng)用，以及CYP酶主導(dǎo)氯氮平代謝的研究現(xiàn)狀。同時(shí)也對本論文的主要研究工作內(nèi)容做了介紹。
　　本論文第二章使用新建立的分析方法DE-DD（動(dòng)態(tài)排除與數(shù)據(jù)依賴聯(lián)用），分析普萘洛爾、維拉帕米及氨氯地平在大鼠肝微粒體中的代謝產(chǎn)物，并與已報(bào)道文獻(xiàn)比較，檢測方法的準(zhǔn)確性;使用新方法分析氯氮平在大鼠和人肝微粒中的代謝產(chǎn)物，并推測出可能的代謝途徑，分析新發(fā)

3、現(xiàn)的代謝產(chǎn)物。所有試驗(yàn)藥品在肝微粒中進(jìn)行孵育，在37℃條件下經(jīng)水浴振蕩，在達(dá)到孵育完成時(shí)間后使用甲醇終止反應(yīng)，離心樣品取上清液，在氮?dú)庀逻M(jìn)行樣品濃縮，以水-0.1％甲酸為水相，乙腈-0.1％甲酸為有機(jī)相，流速為0.6 mL/min，Thermo Hypersil-C18(2.1×50 mm，1.9μm)色譜柱進(jìn)行梯度洗脫分離。采用Thermo LTQ XL型線性離子阱質(zhì)譜儀，新型電噴霧電離源(HESI)，全掃描監(jiān)測(Full scan)

4、，同時(shí)進(jìn)行二級碎片和三級碎片掃描?？疾霥E-DD方法的所得結(jié)果，并以此結(jié)果同相關(guān)報(bào)道的文獻(xiàn)進(jìn)行比較，確定所得結(jié)果的可靠性以及準(zhǔn)確性。本方法能夠較為全面的發(fā)現(xiàn)藥物體外模擬代謝實(shí)驗(yàn)中所產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，并同時(shí)可以獲取代謝產(chǎn)物的多級碎片信息，節(jié)約樣品分析次數(shù);能夠在針對未知化合物進(jìn)行代謝產(chǎn)物分析時(shí)快速、準(zhǔn)確和高效的獲取代謝物質(zhì)譜碎片信息，為下步的代謝物結(jié)構(gòu)鑒定提供豐富的質(zhì)譜信息。
　　論文第三章我們使用DE-DD的分析方法分析氯氮平在人和

5、大鼠肝微粒中孵育后的樣品，樣品孵育的實(shí)驗(yàn)操作與普萘洛爾、維拉帕米和氨氯地平的相同。根據(jù)DE-DD方法所得的結(jié)果，分析氯氮平在人和大鼠肝微粒體中的代謝差異。并由結(jié)果推測出可能的代謝途徑，比較氯氮平在不同種屬間的代謝差異。根據(jù)實(shí)驗(yàn)分析的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)氯氮平主要的代謝產(chǎn)物在大鼠和人之中是有較大的差異。其中氯氮平在大鼠肝微粒體中的主要代謝產(chǎn)物為去甲基化氯氮平。而氯氮平在人肝微粒體中的主要的代謝產(chǎn)物為氮-氧化氯氮平。同時(shí)，葡萄糖醛酸化氯氮平為人肝微粒

6、體中所獨(dú)有的代謝產(chǎn)物;去甲基氧化氯氮平和開環(huán)氧化氯氮平為大鼠肝微粒體中所獨(dú)有的代謝產(chǎn)物。
　　論文第四章我們選取了人肝微粒體為模型，進(jìn)行體外模擬代謝實(shí)驗(yàn)，旨在發(fā)現(xiàn)催化氯氮平在人肝微粒體中主要代謝產(chǎn)物的CYP酶亞型。因此進(jìn)行關(guān)于催化氯氮平代謝的CYP酶篩選實(shí)驗(yàn)，選取1A2、2B6、2C8、2C9、2C19、2D6和3A4為代表的CYP酶亞型進(jìn)行孵育實(shí)驗(yàn)，這7種亞型基本占到了CYP450的92％以上，因此可以獲得較為可靠的結(jié)果。同時(shí)分

7、別考慮含有抑制劑和不含有抑制劑的兩種情況。經(jīng)過樣品分析后，總結(jié)所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，表明在單種亞型CYP酶的孵育體系中，主導(dǎo)氯氮平在人肝微粒體中代謝的主要酶為1A2。2D6和3A4也參與氯氮平的代謝，但不是催化氯氮平代謝的主要酶。其中1A2主要催化去甲基化氯氮平的產(chǎn)生，2D6參與催化去甲基氯氮平，3A4參與催化氮氧化氯氮平。
　　論文第五章我們對所有的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了匯總以及討論，得出了一下結(jié)論。本論所建立的代謝產(chǎn)物分析方法具有靈敏、高效、