應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的miRNA芯片技術(shù)研究脂肪肉瘤的miRNA表達(dá)差異譜.pdf

1、背景與目的:軟組織腫瘤(soft tissue sarcomas，STS)是一類很少見的腫瘤，具有多種組織類型。而在這些組織類型中最多見的是脂肪肉瘤。脂肪肉瘤發(fā)生在后腹膜，可以很長一段時(shí)間沒有任何癥狀，脂肪肉瘤最大的特點(diǎn)就是易于復(fù)發(fā)，較少轉(zhuǎn)移。根據(jù)2002年WHO對脂肪肉瘤的分類標(biāo)準(zhǔn)，脂肪肉瘤分為5個(gè)組織亞型，歸類為3個(gè)生物學(xué)類型:1）高分化脂肪肉瘤和低分化脂肪肉瘤;2）粘液細(xì)胞型/圓型細(xì)胞型脂肪肉瘤;3）多形性脂肪肉瘤。去分化脂肪肉瘤

2、、圓型細(xì)胞型脂肪肉瘤和多形性脂肪肉瘤被認(rèn)為是惡性程度較高、侵襲性較強(qiáng)的種類;而粘液細(xì)胞型脂肪肉瘤及高分化脂肪肉瘤則被認(rèn)為是低度惡性種類。手術(shù)的完整切除是現(xiàn)今治療的基石。切緣陰性（1-2cm）代表良好的結(jié)果，但是脂肪肉瘤大都發(fā)生于后腹膜，因此完整切除困難，更加大了復(fù)發(fā)的可能。目前化學(xué)療法以及放射療法多用于輔助治療，但除了MLS/RCLS外療效較差，因此現(xiàn)在急切需要發(fā)展新的靶向治療方法。microRNAs(miRNAs)是一類含有18-24

3、個(gè)核苷酸(nt)的單鏈RNA，負(fù)向調(diào)節(jié)靶向mRNAs的表達(dá)。MiRNAs的表達(dá)異?？梢愿淖兗?xì)胞的分化，引起腫瘤的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，miRNAs可以作為癌基因和抑癌基因存在，已經(jīng)有多種靶向miRNA的抗腫瘤藥物研發(fā)出來應(yīng)用于臨床，并且取得較好療效?，F(xiàn)今在脂肪肉瘤領(lǐng)域，miRNAs的研究非常少，本研究用miRNA高通量芯片對25例脂肪肉瘤組織，18例脂肪肉瘤患者的正常深部脂肪組織（距離腫瘤邊緣大于5cm）和16例脂肪瘤肉瘤旁組織(距離

4、腫瘤邊緣小于1cm)進(jìn)行miRNA的篩選，分析脂肪肉瘤間的特異性miRNA表達(dá)差異譜，為未來的進(jìn)一步探索與其相關(guān)的分子機(jī)制，尋找新的治療靶點(diǎn)開發(fā)新藥研究做鋪墊。
　　方法:應(yīng)用基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR的miRNA芯片技術(shù)，對25例脂肪肉瘤組織，18例脂肪肉瘤患者的正常深部脂肪組織（距離腫瘤邊緣大于5cm）和16例脂肪瘤肉瘤旁組織(距離腫瘤邊緣小于1cm)進(jìn)行1920個(gè)miRNA的篩選，分析脂肪肉瘤間的特異性miRNA表達(dá)差異譜。應(yīng)用

5、實(shí)時(shí)熒光定量PCR對部分表達(dá)差異的miRNAs在脂肪肉瘤和脂肪細(xì)胞中的表達(dá)進(jìn)行驗(yàn)證。
　　結(jié)果:對熒光定量PCR芯片結(jié)果進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，脂肪肉瘤和正常深部脂肪組織的miRNAs表達(dá)差異:40個(gè)miRNAs在脂肪肉瘤中表達(dá)增高，21個(gè)miRNAs表達(dá)降低;脂肪肉瘤和瘤旁脂肪組織的miRNAs表達(dá)差異:121個(gè)miRNAs存在表達(dá)差異;瘤旁脂肪組織和正常深部組織的miRNAs表達(dá)差異:9個(gè)miRNAs在瘤旁脂肪組織中高表達(dá)，2個(gè)低表達(dá);

6、脂肪肉瘤各亞型之間miRNAs表達(dá)存在差異。通過SVM方法得出8個(gè)miRNAs(has-miR-369-3p，has-miR-196a，has-miR-135b，has-miR-376b,has-miR-486-5p,has-miR-486-3p,has-miR-497,has-miR-144*)在正常組織、瘤旁組織和脂肪肉瘤中存在顯著差異;進(jìn)一步熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)在脂肪肉瘤細(xì)胞和正常脂肪細(xì)胞系中存在有相同的表達(dá)差異。
　　結(jié)