宮頸鱗癌轉(zhuǎn)移相關miRNA表達譜的初步研究.pdf

1、目的：應用miRNA基因芯片篩選宮頸鱗癌盆腔淋巴結轉(zhuǎn)移陰性組和陽性組miRNA表達差異，尋找診斷和治療宮頸鱗癌轉(zhuǎn)移的新型生物學標志物和生物靶點，為進一步研究宮頸鱗癌淋巴結轉(zhuǎn)移相關miRNA的調(diào)控機制提供實驗依據(jù)。
　　 方法：1.收集在我院行廣泛子宮切除+盆腔淋巴結清掃術的宮頸鱗癌患者盆腔淋巴結陰性組6例及陽性組4例。
　　 2.提取各標本總RNA，利用miRNA基因芯片篩選盆腔淋巴結陽性組/陰性組上調(diào)或下調(diào)2倍以上差異

2、miRNA。
　　 3.從篩選出的miRNA中挑選出差異明顯的miRNA，利用實時熒光定量PCR技術驗證miRNA基因芯片結果。
　　 4.利用生物信息學網(wǎng)對表達差異的miRNA基因進行靶基因預測。
　　 結果：
　　 (1)我們通過miRNA基因芯片篩選出宮頸癌淋巴結轉(zhuǎn)移陽性組和陰性組有176條miRNAs差異表達，根據(jù)以往研究及生物信息學網(wǎng)預測其中有48條差異miRNAs對應的靶基因中有與調(diào)控腫瘤相關

3、基因，其中26條差異miRNAs上調(diào)，22條差異miRNAs下調(diào)，其中16條為差異的miRNAs對應的靶基因中有與調(diào)控腫瘤轉(zhuǎn)移相關基因。
　　 (2)實時定量RT-PCR檢測到 miR-490-5p、miR-323-3p、miR-328，上調(diào)的倍數(shù)分別為：56.89536、8.180334、31.94124，而miR-31、miR-126、miR-144，下調(diào)的倍數(shù)為：16.3559、9.71628、32.4675，RT-PCR

4、上調(diào)和下調(diào)的趨勢是一致的，證明芯片結果是可靠的。
　　 (3)經(jīng)RT-PCR驗證的6條miRNAs中miR-490-5p、miR-328、miR-31、miR-144、miR-126的靶基因中有與調(diào)控腫瘤轉(zhuǎn)移有關的基因。同一靶基因同時受到多個miRNAs調(diào)控，同一個miRNAs可以同時調(diào)控多個靶基因。
　　 結論：
　　 1.本實驗用miRNA基因芯片檢測到在宮頸癌淋巴結轉(zhuǎn)移陽性組和陰性組有176條表達差異miR