電離輻射誘發(fā)miRNA表達(dá)譜改變及EGCG輻射防護(hù)分子機(jī)制的初步研究.pdf

1、電離輻射（ionizing radiation, IR）可通過直接或間接作用造成機(jī)體損傷， microRNA（miRNA）是一類非編碼小RNA，與電離輻射損傷密切相關(guān)。表沒食子茶素沒食子酸酯（epigallocatechin gallate，EGCG）是茶多酚中抗氧化活性最高的成分，主要通過清除自由基等方式發(fā)揮輻射防護(hù)作用。目前關(guān)于 EGCG的研究多集中在輻射防護(hù)方面，而進(jìn)一步的輻射防護(hù)分子機(jī)制研究較少。
　　為從miRNA角度探

2、究EGCG的輻射防護(hù)分子機(jī)制，首先建立小鼠輻射損傷模型，采用高通量測序技術(shù)對小鼠體內(nèi)的miRNA進(jìn)行差異表達(dá)篩選。小鼠經(jīng)一次性總劑量為4 Gy的60Co全身輻射后，其肝臟中共鑒定出48個(gè)差異表達(dá)的miRNA，包括20個(gè)表達(dá)上調(diào)的miRNA以及28個(gè)表達(dá)下調(diào)的miRNA。輻射后小鼠胸腺中差異表達(dá)的miRNA共有112個(gè)，其中77個(gè)miRNA上調(diào)，35個(gè)miRNA下調(diào)。qRT-PCR驗(yàn)證結(jié)果與測序結(jié)果一致。靶基因預(yù)測結(jié)果顯示，小鼠體內(nèi)差異表

3、達(dá)miRNA的靶基因主要參與基因的復(fù)制、重組與修復(fù)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制、轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制等生命活動，并參與小鼠的相關(guān)肝代謝途徑以及小鼠胸腺中影響 T淋巴細(xì)胞成熟的信號通路。
　　根據(jù)高通量測序結(jié)果，以miR-34a作為研究對象進(jìn)一步探究EGCG的體內(nèi)外輻射防護(hù)分子機(jī)制。在本文中，CCK8活力檢測結(jié)果顯示，經(jīng)不同濃度EGCG（0、5、10、20、50、100μM）預(yù)處理24h后，AML-12細(xì)胞活力顯著性上升，且在輻射2或4 Gy后培養(yǎng)0、1

4、2 h，相比于輻射組，其細(xì)胞活力顯著性提高（p<0.05），連續(xù)培養(yǎng)24 h后細(xì)胞活力呈劑量依賴性上升（p<0.05）。qRT-PCR結(jié)果顯示，與對照組相比，電離輻射引發(fā) AML-12細(xì)胞中 miR-34a表達(dá)量顯著性上調(diào)（0.001

5、表達(dá)（p<0.05）。小鼠經(jīng)4 Gy輻射后，與對照組相比，其肝臟中miR-34a表達(dá)量顯著性上調(diào)（p<0.01），Sirt1表達(dá)量顯著性下調(diào)（p<0.001）。灌喂不同濃度（30、60、120 mg/kg BW?d）的EGCG后，與輻射組相比，小鼠肝臟中 miR-34a表達(dá)量顯著性下調(diào)且呈劑量依懶性（p<0.05），Sirt1表達(dá)上調(diào)（p>0.05）。
　　本論文主要利用高通量測序技術(shù)篩選電離輻射引發(fā)的差異表達(dá)的miRNA，并以m