宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)miRNA篩選及機制研究.pdf

1、後旦大擎博士學(xué)位論文學(xué)校代碼：10246學(xué)號：06301010164宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)miRNA篩選及機制研究ScreeningandMechanicalStudyofLymphNodeMetastasisRelatedmiRNAinCervicalCancer院系：專業(yè)：姓名：指導(dǎo)教師：完成日期：上海醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)(八年制)韓嘯天吳小華教授2014年4月16日宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)miRNA篩選及機制研究摘要目的：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是宮頸癌主

2、要轉(zhuǎn)移途徑，也是影響宮頸癌患者預(yù)后的重要因素。假設(shè)miRNA能調(diào)節(jié)宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，研究不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移能力的宮頸癌組織中的miRNA表達差異，篩選出淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)的miRNA，并且研究其調(diào)節(jié)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的機制。材料和方法：在宮頸癌新鮮標本中，用miRNA芯片篩選出不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移能力的宮頸癌的miRNA的差異表達，RealtimePCR驗證miRNA芯片篩選的結(jié)果。在SiHa細胞株中過表達或低表達候選miRNA含量，通過體外TransweU

3、實驗檢測細胞的遷移和侵襲能力。用慢病毒載體構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染候選miRNA的穩(wěn)轉(zhuǎn)株，并建立裸鼠宮頸癌細胞轉(zhuǎn)移模型。通過生物信息軟件、靶基因mRNArealtimePCR和WesternBlot蛋白檢測三種方法綜合推斷miR652的靶基因。結(jié)果：miRNA芯片篩查顯示，對比無盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織，有盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織中2個miRNA高表達(miR1423p，miR652)(PO05)，3個miRNA低表達(miR196b，miR3

4、20b和miR424)(P005)。RealtimePCR證實篩選出的miRNA表達變化趨勢與芯片結(jié)果相似，但只有miR196b及miR652的差異表達具有統(tǒng)計學(xué)差異(PO05)。Transwell實驗顯示，低表達miR196b和過表達miR652可以增進細胞遷移和侵襲能力，過表達miR196b和低表達miR652可以抑制細胞遷移和侵襲能力。未能發(fā)現(xiàn)改變miR1423p、miR320b和miR424表達量會影響細胞遷移或侵襲功能。綜合上

5、述結(jié)論，miR196b和miR652可能與宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。從創(chuàng)新性考慮，暫選miR652進行后續(xù)研究。在體內(nèi)實驗中，未有足夠證據(jù)說明miR652能增進腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移能力，但PETCT顯示miR652可能有促進肝臟轉(zhuǎn)移病變的趨勢。綜合Targetscan、miRDB、miRSearch、miRTarBase和miRwalk共5個miRNA數(shù)據(jù)庫聯(lián)合預(yù)測，并查閱靶基因資料文獻，獲得6個miR652的候選靶基因，分別為BCLl1A、IS