甲狀腺乳頭狀癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)因素研究.pdf

1、甲狀腺癌是最常見的一類內(nèi)分泌惡性腫瘤。甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)約占甲狀腺癌的80％，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢。大部分PTC經(jīng)外科手術(shù)切除、后續(xù)的I131治療和促甲狀腺激素抑制治療后，預(yù)后良好，死亡率低。但仍有部分PTC易轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)，預(yù)后差。如何進一步提高此類PTC患者的生存率及生存質(zhì)量，其中很重要一點是如何給予患者最佳治療方案，包括手術(shù)方案。PTC手術(shù)方案的選擇國內(nèi)及國際上都存在爭議

2、。目前主要是根據(jù)不同的預(yù)后評分系統(tǒng)，將病人分為高危及低危組，給予不同手術(shù)方案。這類評分系統(tǒng)主要涉及各項臨床指標(biāo)，不能精確判斷具有較高侵襲性的PTC，對手術(shù)方案的選擇指導(dǎo)意義有限。 隨著分子生物學(xué)、免疫學(xué)等基礎(chǔ)學(xué)科的發(fā)展，國內(nèi)外專家學(xué)者紛紛尋找能夠顯示分化型甲狀腺癌預(yù)后的分子標(biāo)記物，希望能完善或取代現(xiàn)有的預(yù)后評價系統(tǒng)?！　≌{(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatoryTcell，Treg)在腫瘤的免疫抑制中起著重要作用，是腫瘤逃避免疫監(jiān)視的

3、重要機制。到目前為止，叉頭樣轉(zhuǎn)錄因子FOXP3是Tree細(xì)胞最特異的標(biāo)記。應(yīng)用該標(biāo)記研究Treg細(xì)胞與惡性腫瘤的關(guān)系，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在許多惡性腫瘤中，Treg細(xì)胞與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后相關(guān)。FOXP3能否作為衡量PTC轉(zhuǎn)移、預(yù)后的標(biāo)記，到目前為止尚未見相關(guān)報道。 BRAY突變、RET重排是PTC中最主要的分子病理機制。兩者與PTC轉(zhuǎn)移、預(yù)后之間的關(guān)系尚有爭議。 P53突變是人類腫瘤中最常見的基因突變。P53突變使得細(xì)胞

4、易于出現(xiàn)其他基因損害，因此常與一些具侵襲性行為的癌相關(guān)。β-連環(huán)蛋白(β-catenin，β-cat)是一種胞漿蛋白，是上皮鈣粘蛋白(E—cadherin，E-cad)連接細(xì)胞骨架微絲系統(tǒng)的橋梁，同時它也是Wnt信號傳導(dǎo)通路中的重要組成部分。它的異常表達與腫瘤失分化的進展程度密切相關(guān)。骨橋蛋白(osteopontin，OPN)是細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix，ECM)中一種重要的功能性蛋白，近年研究表明它與腫瘤細(xì)胞

5、生長、增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。上述三指標(biāo)與PTC轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系需要研究。 本課題主要研究Treg細(xì)胞、BRAF突變、REX重排及β-cat、P53、OPN與PTC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系，同時研究上述指標(biāo)與PTC各臨床因素之間的關(guān)系，以及各項指標(biāo)之間是否存在聯(lián)系。 第一部分 FOXP3在PTC中的表達及與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系研究　　Treg細(xì)胞與PTC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間是否有關(guān)聯(lián)。并分析與Treg細(xì)胞有關(guān)的臨床因素。 應(yīng)

6、用實時定量熒光RT-PCR的方法分別對PTC及甲狀腺良性疾病標(biāo)本及外周血的淋巴細(xì)胞中FOXP3mRNA含量進行比較；用流式細(xì)胞儀的方法檢測PTC及甲狀腺良性疾病患者外周血中FOXP3+T細(xì)胞、CD4+CD25+T細(xì)胞，用免疫組化的方法檢測PTC及甲狀腺良性疾病標(biāo)本中T細(xì)胞的FOXP3蛋白表達。 結(jié)果顯示： 1.PTC的FOXP3mRNA表達量比甲狀腺良性疾病顯著性增高。 2.PTC的FOXP3+T細(xì)胞數(shù)比甲狀腺良

7、性疾病顯著性增高。 3.PTMC中FOXP3mRNA表達量較其它PTC顯著性增高。 4.PTC中FOXP3mRNA表達量與年齡和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)有關(guān)。年齡越大，癌組織中FOXP3mRNA表達量越高；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)越多，癌組織中FOXP3mRNA表達量越低。但在有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的PTC之間，癌組織的FOXP3mRNA表達量無顯著差異。 5.PTC與甲狀腺良性疾病患者外周血中FOXP3mRNA表達量無顯著性差異。 第

8、二部分　P53、β-cat和OPN在PTC中的表達及與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系研究　　P53、β-cat并gOPN的表達與PTC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系及與臨床各因素之間的關(guān)系。運用免疫組化的方法在PTC中檢測P53、β-cat和0PN的表達。 結(jié)果顯示： 1.有P53及β-cat異常表達比無異常表達的PTC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率顯著增高。 2.有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及OPN異常表達PTC的P53異常表達率顯著增高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)、FOXP3+

9、細(xì)胞數(shù)與P53異常表達顯著性正相關(guān)。 3.有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移PTC的B-cat異常表達率比無轉(zhuǎn)移的PTC顯著增高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)與B-cat異常表達顯著性正相關(guān)，多癌灶PTC的B-cat異常表達率顯著高于單癌灶PTC病例。 第三部分　BRAF突變及RET重排與PTC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系　　分析BRAF突變及RET重排與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及各臨床因素之間的關(guān)系。總結(jié)本研究中所有可能影響PTC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的因素。 用測序的方法檢測PTC

10、標(biāo)本中BRAF的T1799A突變。用RT—PCR的方法檢測PTC標(biāo)本中的RET／PTCI重排及RET／PTC3重排，并將出現(xiàn)目標(biāo)條帶的PCR產(chǎn)物測序。 結(jié)果顯示： 1.有B-cat異常表達PTC的BRAF突變率顯著降低。 2.BRAF突變及RET重排與PTC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān) 3.有P53、β-cat異常表達及多癌灶的PTC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率更高，年齡<43的PTC病例更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。 結(jié)論：