宮頸鱗癌組織轉移相關基因篩查的初步研究.pdf

1、目的:
　　 應用基因芯片檢測盆腔淋巴結轉移組和無轉移組宮頸鱗癌組織中差異表達基因，從中篩選轉移相關基因，為預測宮頸鱗癌轉移提供有用的分子標志物，為闡明宮頸鱗癌轉移的機制提供線索。
　　 方法:
　　 1.收集在我院行廣泛子宮切除+盆腔淋巴結清掃術的宮頸鱗癌患者癌組織標本，其中盆腔淋巴結轉移組4例，無轉移組6例。
　　 2.抽提各宮頸鱗癌組織總RNA，逆轉錄合成cDNA，利用羅氏NimbleGen全基因組

2、表達譜芯片篩選盆腔淋巴結轉移組及無轉移組差異表達基因，得出兩組差異表達基因譜。
　　 3.從差異表達基因譜中選取6個基因，在盆腔淋巴結轉移組及無轉移組宮頸鱗癌組織中進行實時熒光定量PCR檢測，以公式2-△△Ct=2-△Ct轉移組/2-△Ct無轉移組計算各基因表達差異倍數，與基因芯片結果對比，以評估基因芯片準確性。
　　 4.通過基因庫檢索及PUBMED文獻搜索結合GO(gene ontology)分類，從差異表達基因譜中

3、篩選出與腫瘤轉移相關基因。
　　 結果:
　　 1.差異基因篩選:通過基因芯片在盆腔淋巴結轉移組及無轉移組宮頸鱗癌組織中篩選出表達差異明顯的基因329個，其中在淋巴結轉移組宮頸鱗癌組織中相對于無轉移組上調基因有187個，下調基因有142個。
　　 2.實時熒光定量PCR驗證結果:在兩組宮頸鱗癌組織基因芯片篩選出的差異表達基因中，選取KLK6、FGA、CTGF、CPB2、PRL1及CCL20進一步行實時熒光定量PC

4、R檢測，計算出差異表達倍數，在盆腔淋巴結轉移組中分別為上調2.7014倍、11.7411倍、3.4248倍、12.1232倍、4.4272及下調12.7065倍。這些基因的差異表達趨勢與基因芯片結果一致。
　　 3.篩選腫瘤相關基因:通過基因庫及PUBMED文獻檢索各基因功能并結合GO分類，從差異表達基因中篩選出與腫瘤轉移相關的基因共44個，其中在盆腔淋巴結轉移組宮頸鱗癌組織中上調的基因29個，下調的基因15個。