宮頸鱗癌的候選早期預(yù)警基因表達(dá)、HPV感染及現(xiàn)行臨床診斷方法特異性篩查研究.pdf

1、目的：宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤，宮頸癌位居我國(guó)婦癌第一位。新疆維吾爾族婦女宮頸癌患病率及病死率明顯高于生活在同一個(gè)環(huán)境的其他民族，病死率在全國(guó)少數(shù)民族中占第一位。如何在宮頸癌早期或癌前階段找到預(yù)測(cè)宮頸癌及預(yù)后的指標(biāo)和方法是宮頸癌防治中一個(gè)重要課題。本研究通過(guò)宮頸病變標(biāo)本的特異性甲基化候選基因表達(dá)、HPV感染及現(xiàn)行宮頸癌臨床診斷方法特異性的篩查分析，探討一種宮頸癌早期預(yù)警和預(yù)后的綜合指標(biāo)體系，評(píng)價(jià)其可能性和可行性。本研究目的包

2、括以下三個(gè)方面：1）宮頸癌組織內(nèi)的抑癌基因啟動(dòng)子發(fā)生高度甲基化可能使基因表達(dá)水平下降或基因休眠。本研究從蛋白質(zhì)水平觀察四種宮頸鱗癌特異性高甲基化候選基因的蛋白表達(dá)水平與宮頸癌前病變病理進(jìn)程的關(guān)系及其族群差異；2）對(duì)維吾爾族婦女不同宮頸病變組織進(jìn)行人乳頭狀瘤病毒（human papilloma- virus, HPV）鑒定分析，探討宮頸病變病理進(jìn)程與HPV感染率及其亞型的關(guān)系；3）基于臨床診斷結(jié)果對(duì)液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測(cè)（ThinprepCy

3、tologic Test,（TCT）及陰道鏡檢查對(duì)宮頸病變的特異性、可行性及對(duì)臨床早期診斷的應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行分析與評(píng)價(jià)。方法：1）臨床標(biāo)本收集與免疫組織化學(xué)分析：根據(jù)新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科在2006-2008年期間存檔，收取漢族和維吾爾族婦女宮頸病變患者的福爾馬林浸泡和石蠟包埋組織標(biāo)本共218例，包括宮頸炎/CINⅠ79例，CINⅡ/Ⅲ 89例，宮頸癌50例。根據(jù)不同文獻(xiàn)資料，選擇4種宮頸癌特異性高甲基化侯選基因，包括O6-甲基鳥(niǎo)嘌

4、呤-DNA 甲基轉(zhuǎn)移酶（O6-methylguanine-DNA methyl-transferase，MGMT）、死亡相關(guān)蛋白激酶（death associated protein kinase1，DAPK1）、人類白細(xì)胞抗原（human leukocyte antigen-I，HLA-I）、雌激素受體α（estrogen receptor-α，Erα）。采用免疫組織化學(xué)SP法和特異性抗體鑒定以上基因的蛋白質(zhì)表達(dá)水平，研究候選基因蛋白

5、質(zhì)表達(dá)水平變化與宮頸病變病理進(jìn)程的關(guān)系；2）臨床標(biāo)本收集、DNA制備和HPV鑒定：收集2005年-2008年在新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦科就治宮頸病變患者的石蠟包埋組織標(biāo)本共223例，包括慢性宮頸炎38例，CIN 94例，宮頸鱗癌91例。制備組織DNA，采用HPV通用引物MY09/11（MY09：5′-CGTCCMARRG GAWA-CTGATC-3′；MY11：5′-GCMCAGGGWCATAAYAATGG -3′）、常規(guī)PCR擴(kuò)增、

6、瓊脂糖凝膠電泳和紫外成像方法篩選HPV陽(yáng)性DNA標(biāo)本。采用亞能生物公司提供的HPV分型芯片試劑盒，對(duì)HPV陽(yáng)性的DNA標(biāo)本的HPV亞類型別進(jìn)行檢測(cè)。該芯片可以鑒別23種常見(jiàn)的HPV亞型，包括5種低危HPV亞型：6、11、42、43、44；18種高危亞型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4；3）陰道鏡和TCT方法診斷宮頸病變的比較分析：根據(jù)新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦

7、科臨床診斷，系統(tǒng)記錄4032例TCT和215例陰道鏡篩查的病例信息，以組織病理學(xué)檢查結(jié)果為驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)，比較分析TCT和陰道鏡診斷宮頸病變的特異性和可行性，以及對(duì)癌前病變的早期預(yù)警價(jià)值。結(jié)果：1）隨著宮頸病變的病理進(jìn)程，DAPK-1、Erα、HLA- I蛋白的表達(dá)逐漸減弱；在維、漢兩族CINⅡ/Ⅲ和宮頸鱗癌中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于宮頸炎/CINⅠ（P＜0.05），在宮頸癌中的陽(yáng)性表達(dá)率最低；DAPK-1、Erα、HLA- I表達(dá)率變化趨勢(shì)與兩

8、個(gè)族群的宮頸病變病理進(jìn)程密切相關(guān)。MGMT在漢族婦女宮頸炎/CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ和宮頸鱗癌中的表達(dá)幾乎不變；然而在維吾爾族婦女隨著宮頸病變病理進(jìn)程而逐漸升高，而且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；2）223例宮頸標(biāo)本中，HPV總陽(yáng)性率為58.7%（131/223），隨著宮頸病變級(jí)別的增加，HPV陽(yáng)性率逐漸升高即慢性宮頸炎＜CINⅠ＜CINⅡ＜CINⅢ＜宮頸鱗癌。HPV16是維吾爾族婦女宮頸病變中主要的高危致病亞型，占HPV陽(yáng)性病例的90.

9、8%，在宮頸鱗癌病例中達(dá)到96.3%，其次為HPV18型，極少數(shù)為HPV58型。HPV16感染率的變化趨勢(shì)與宮頸病變病理進(jìn)程密切相關(guān)，但是與宮頸癌的不同分化程度無(wú)關(guān)（P＞0.05）；3）參與TCT檢查的4032例中，發(fā)現(xiàn)有異常257例，占6.37%；其中意義不明的不典型鱗狀細(xì)胞和腺細(xì)胞（ASCUS含AGUS）157例（3.89%），低度鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL）54例（1.34%），高度鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL）38例（0.94%），宮

10、頸癌 8例（0.20%）。190例TCT異常者經(jīng)組織病理學(xué)檢查，確認(rèn)為宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）占45.3%，宮頸鱗癌占3.68%，在ASCUS、LSIL和HSIL的病例中CIN的檢出率分別為36.5%、53.2%和71.9%，宮頸癌為100%。TCT鑒定的異常結(jié)果與組織病理學(xué)檢查結(jié)果有一定的相關(guān)性（P＜0.01），表明TCT 能夠初步篩查宮頸癌前病變和宮頸癌，TCT細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果越嚴(yán)重，病理診斷結(jié)果為CIN及宮頸癌的可能性越大。參與陰道

11、鏡檢查的215例中，陰道鏡擬診為慢性宮頸炎150例（69.8%）、CIN 43例（20.0%）、宮頸癌9例（4.2%）、息肉7例（3.3%）、尖疣6例（2.8%）?；顧z病理報(bào)告為慢性宮頸炎163例（75.8%）、CIN 31例（14.4%）、宮頸癌 8例（3.7%）、息肉7例（3.3%）、尖疣6例（2.8%）。陰道鏡擬診的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值均較高。陰道鏡對(duì)宮頸疾病的擬診結(jié)果與病理診斷結(jié)果有較高的符合率。結(jié)論：1）對(duì)于

12、MGMT、DAPK1、HLA- I、Erα等基因的宮頸癌特高甲基化已有文獻(xiàn)報(bào)道，但是在不同人群或族群之間有較大差異。本研究證明了以上四種基因的蛋白質(zhì)表達(dá)水平變化與維、漢兩族婦女宮頸病變病理進(jìn)程密切相關(guān)。此結(jié)果，不僅成為族群特異性基因甲基化研究的重要起點(diǎn)，而且為建立新一代族群和宮頸癌特異性早期診斷指標(biāo)提供了重要依據(jù)；2）對(duì)于維吾爾族婦女宮頸癌的HPV感染和型別，已有文獻(xiàn)報(bào)道，但是癌前病變患者的HPV型別鑒定相關(guān)的系統(tǒng)研究甚少。本研究通過(guò)H

13、PV基因型芯片分型，不僅證明維吾爾族婦女宮頸病變病理進(jìn)程與HPV感染率上升密切相關(guān)，而且HPV16也是主要感染亞型，其次為HPV18和58。此結(jié)果，在很大程度上填補(bǔ)了該族群宮頸病變不同階段的HPV感染亞型分布的空白，而且進(jìn)一步驗(yàn)證了以往研究對(duì)宮頸癌患者HPV感染率相關(guān)的結(jié)論，對(duì)HPV疫苗的應(yīng)用和宮頸癌的綜合防治有重要意義；3）宮頸癌及癌前病變的臨床篩查中，TCT是簡(jiǎn)便和較理想的初步篩查手段，陰道鏡擬診結(jié)果對(duì)宮頸病變的正確診斷有重要預(yù)測(cè)價(jià)