Graves病易感基因的篩查和功能初步研究.pdf

1、Graves病是一種常見的多基因疾病，同時(shí)是一種最常見的器官特異性自身動(dòng)脈粥樣硬化，其發(fā)生是由遺傳因素和環(huán)境因素的共同影響所造成的。通過連鎖分析，人們發(fā)現(xiàn)了許多與Graves病可能相關(guān)的染色體易感區(qū)段，其中位于5q31區(qū)段的結(jié)果同時(shí)得到了中國和日本研究小組的確認(rèn)，因此在這一區(qū)域很可能包含一個(gè)至少在東亞人群中比較特異的易感位點(diǎn)。本文對(duì)Graves病易感基因的篩查和功能進(jìn)行了研究。主要內(nèi)容如下： ⑴在Sq31區(qū)域Lod值最高的Mar

2、ker D5s2090附近的3.OMB區(qū)域內(nèi)，我們按照每15Kb選擇一個(gè)SNP的方法，總共選擇了179個(gè)SNPs進(jìn)行篩選，其中有25個(gè)SNPs位點(diǎn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，并以rs1368408處的差異最為顯著，P值達(dá)到3.69×10-5。接下來我們將關(guān)注的目光進(jìn)一步縮小到rs1368408附近的1.0MB區(qū)域。 ⑵將這一區(qū)段包含的全部11個(gè)基因的外顯子和啟動(dòng)子區(qū)進(jìn)行全測(cè)序，共發(fā)現(xiàn)了83個(gè)SNPs位點(diǎn)；同時(shí)對(duì)于基因間的區(qū)域，按照每5KB一個(gè)

3、SNP位點(diǎn)的原則從NCBI的dbSNP數(shù)據(jù)庫共選擇了39個(gè)SNPs位點(diǎn)。將這1.0MB區(qū)域內(nèi)選擇的全部122個(gè)SNPs，采用MassArray Sequenom技術(shù)，對(duì)山東人群和上海人群進(jìn)行測(cè)序。通過病例對(duì)照分析，發(fā)現(xiàn)在山東、上海和合并人群中分別有20、24和20個(gè)SNPs位點(diǎn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其中以UGRP1基因啟動(dòng)子區(qū)域的SNP位點(diǎn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異最顯著。接著我們對(duì)兩組單獨(dú)人群和合并人群UGRP1基因的9個(gè)SNPs位點(diǎn)組成的單體型進(jìn)行了分析，

4、結(jié)果顯示同時(shí)包含啟動(dòng)子區(qū)P1+P2或P1+P3的單體型統(tǒng)計(jì)學(xué)差異最明顯。同時(shí)我們對(duì)山東人群進(jìn)行了兩位點(diǎn)Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)：UGRP1基因啟動(dòng)區(qū)的P1和P2位點(diǎn)最有可能是Graves病的易感致病位點(diǎn)。 ⑶在1.0Mb區(qū)域初步確定了Graves病的易感基因UGRP1后，我們?cè)诟笠?guī)模的我國漢族北方和南方人群以及小規(guī)模新疆少數(shù)民族哈薩克族和維吾爾族人群進(jìn)行了驗(yàn)證工作，進(jìn)一步證實(shí)了UGRP1是Graves病的易感基因這一結(jié)論。

5、 ⑷為了從功能方面找到UGRP1易感基因與Graves病發(fā)病機(jī)制的關(guān)系，首先在體外試驗(yàn)中，我們通過熒光素酶試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：相對(duì)于正常的啟動(dòng)子序列，啟動(dòng)子區(qū)含有單體型改變的UGRP1基因轉(zhuǎn)錄水平明顯下降。同時(shí)凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)也證實(shí)UGRP1基因啟動(dòng)子區(qū)P1-P3位點(diǎn)的改變，均可影響它們與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合的能力。 ⑸體內(nèi)試驗(yàn)的Real-time PCR和等位基因特異性轉(zhuǎn)錄水平定量試驗(yàn)表明致病性單體型P1+P2及其突變等位基因和致病性單體型

6、P1+P3驅(qū)動(dòng)的UGRP1基因mRNA表達(dá)明顯下降。RT-PCR試驗(yàn)顯示UGRP1基因的受體MARCO在很多免疫相關(guān)的組織都有表達(dá)，這進(jìn)一步提示UGRP1基因可能與Graves病這種自身免疫性疾病有很強(qiáng)的相關(guān)性。 ⑹選擇含有P1+P2和P1+P3單體型改變的Graves病人的組織做基因芯片分析，希望通過免疫相關(guān)基因的改變，對(duì)進(jìn)一步研究UGRP1基因與Graves病發(fā)病之間的相互關(guān)系有提示作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在兩組病人變化相同的基因中，