乙肝易感基因的關(guān)聯(lián)分析及其功能研究.pdf

1、乙肝病毒（Hepatitis B virus，HBV）感染是一種嚴(yán)重影響人類健康的疾病。據(jù)估計，全世界目前約有2.4億HBV感染者。雙生子研究發(fā)現(xiàn)，宿主的遺傳組成是影響乙肝相關(guān)性肝病的重要因素之一。最近，全基因組關(guān)聯(lián)性研究(Genome-wideassociation study, GWAS)報道了STAT4基因多態(tài)性與乙肝感染及其相關(guān)性肝癌顯著關(guān)聯(lián)，在功能上該基因參與了機(jī)體的免疫反應(yīng)過程，揭示STAT4是乙肝相關(guān)性疾病的一個候選基因。

2、在本論文的第一部分內(nèi)容，我們探討了在中國漢族人群中STAT4基因多態(tài)性與乙肝相關(guān)性肝病的關(guān)聯(lián)性。我們首先基于HapMap數(shù)據(jù)庫挑選出位于STAT4上的13個SNP位點，并在3033個個體中對它們進(jìn)行基因分型。我們發(fā)現(xiàn)rs7574865位點與乙肝病毒感染(OR=1.15，95％ CI=1.00-1.31，P=0.046)，以及病毒清除顯著關(guān)聯(lián)(OR=1.17，95％CI=1.02-1.33，P=0.028)。為了增加該結(jié)論的可靠性，我們從

3、數(shù)據(jù)庫上發(fā)表的文章中分別收集了8944個慢性乙肝病毒感染者(Chronic hepatitis B virus infection，CHBVI)患者，8451個健康人群和2081個病毒清除者進(jìn)行Meta分析，同樣發(fā)現(xiàn)rs7574865位點和HBV感染（固定效應(yīng)模型和隨機(jī)效應(yīng)模型下:pooled OR=1.14，pooledP=3.8×10-5）與病毒清除（固定效應(yīng)模型下:pooled OR=1.20，pooledP=0.002;隨機(jī)效應(yīng)

4、模型下:pooledOR=1.25，pooledP=0.044）有著顯著的關(guān)聯(lián)關(guān)系。進(jìn)一步的單倍型分析發(fā)現(xiàn)，由rs8179673，rs7574865，rs4274624，rs11889341和rs10168266組成的單倍型CTCTT，不僅與HBV感染顯著關(guān)聯(lián)(OR=0.87，95％ CI=0.76-0.99，P=0.022)，而且還與病毒清除有明顯相關(guān)(OR=0.86，95％ CI=0.75-0.99，P=0.018)。利用生物信息學(xué)

5、方法對這個單倍型內(nèi)的SNP位點進(jìn)行功能預(yù)測，發(fā)現(xiàn)它們均可能與STAT4基因表達(dá)調(diào)節(jié)有關(guān)，但這需要進(jìn)一步的功能驗證。綜上，我們的研究首次證明了在中國漢族人群中STAT4不僅與HBV感染相關(guān)，而且還與感染后病毒的清除也顯著關(guān)聯(lián)。
　　然而，通過GWAS發(fā)現(xiàn)的SNP位點，到目前為止也只能解釋疾病遺傳的一小部分，提示還有許多與疾病相關(guān)的基因有待進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)。在本論文的第二部分，我們采用了新的研究策略來尋找與HBV感染相關(guān)的易感位點。我們首先

6、在300對同胞對和3087個病例-對照人群樣本中進(jìn)行遺傳關(guān)聯(lián)性研究，發(fā)現(xiàn)了位于31個基因上的36個SNP位點在兩個樣本人群中均名義上與HBV感染相關(guān)，且方向一致。對于這些基因，我們挑選SEC24D作為候選基因進(jìn)一步研究，主要原因為:第一，來自乙肝病毒感染的原代肝細(xì)胞表達(dá)譜分析發(fā)現(xiàn)，SEC24D表達(dá)水平隨著病毒感染時間的推移而不斷升高(P=4.0×10-4);第二，SEC24D基因多態(tài)性位點rs76459466顯著與乙肝病毒感染風(fēng)險呈負(fù)相

7、關(guān)(ORmeta=0.82，Pmeta=2.0×10-3);遺傳關(guān)聯(lián)分析結(jié)果和表達(dá)數(shù)據(jù)提示我們SEC24D可能是與HBV感染相關(guān)的一個潛在易感基因。基于此，我們設(shè)計了體外實驗從細(xì)胞學(xué)上探討該基因與HBV感染的相關(guān)性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)SEC24D表達(dá)水平升高時，HBV感染相關(guān)標(biāo)記物顯著下降;而當(dāng)抑制該基因的表達(dá)水平時，HBV感染相關(guān)標(biāo)記物顯著升高;提示SEC24D基因起到抵抗乙肝病毒復(fù)制的作用。另外，在土撥鼠動物模型中，我們發(fā)現(xiàn)在病毒感染組中

8、，肝細(xì)胞SEC24D基因表達(dá)水平顯著低于非感染組(P=2.0×10-3)，支持了上述細(xì)胞學(xué)研究的結(jié)果。綜上所述，我們認(rèn)為SEC24D是新的與HBV感染相關(guān)的一個潛在易感基因。
　　總而言之，我們不但首次在中國漢族人群中驗證了STAT4基因多態(tài)性與HBV感染顯著相關(guān)，而且還發(fā)現(xiàn)其與病毒清除也存在明顯關(guān)聯(lián)。此外，我們還利用新的遺傳研究手段，采用整合功能基因組學(xué)的方法發(fā)現(xiàn)了新的與HBV感染相關(guān)的基因SEC24D。但是，這些發(fā)現(xiàn)還需要進(jìn)一