XRCC4基因遺傳變異與乳腺癌各分子亞型發(fā)生易感的關(guān)聯(lián)分析和功能研究.pdf

1、乳腺癌的發(fā)生是遺傳因素和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果。既往研究提示參與DNA雙鏈斷裂修復相關(guān)基因的遺傳變異與乳腺癌的發(fā)生易感密切相關(guān)。XRCC4作為非同源末端連接修復(NHEJ)通路的主要成員在參與DNA損傷修復和維持基因組的穩(wěn)定性中發(fā)揮重要作用。本課題主要研究XRCC4基因遺傳變異與乳腺癌各分子亞型發(fā)生易感的關(guān)系以及內(nèi)在分子生物學機制。
　　本研究將XRCC4作為乳腺癌易感候選基因，在第Ⅰ期（562病例vs.504對照）病例對照研究中

2、對XRCC4進行SNP分型，結(jié)果顯示XRCC4基因上單核苷酸多態(tài)位點(SNP) rs3734091在隱性模型下（rs3734091-TT型）與乳腺癌的發(fā)生顯著相關(guān)(P=0.022)。第Ⅱ期基于社區(qū)健康人群的病例對照研究（1202病例vs.1119對照）進一步驗證了初期結(jié)果，兩期研究(n=3387)合并后rs3734091在隱性模型下與乳腺癌發(fā)生的相關(guān)性更加顯著(OR=3.92，P=0.007)。進一步通過亞組分析，我們發(fā)現(xiàn)rs37340

3、91位點與三陰性乳腺癌(TNBC)的發(fā)生顯著相關(guān)(OR=18.65，P＜0.0001)，但不顯著增加luminal型和HER2+乳腺癌發(fā)生風險。rs3734091位點野生型核苷酸G改變?yōu)門將導致位于XRCC4第247位的丙氨酸錯意突變?yōu)榻z氨酸(p.Ala247Ser, XRCC4A247S)。利用序列比對方法，我們發(fā)現(xiàn)XRCC4A247S毗鄰XRCC4基因的保守核定位序列(NLS)，基于此，我們推測XRCC4A247S可能會對XRCC4

4、蛋白入核造成影響。通過免疫熒光和免疫組化我們分別在細胞水平和組織水平發(fā)現(xiàn)純合XRCC4A247S能造成部分XRCC4蛋白入核障礙，導致異常胞漿定位;而雜合型XRCC4A247S依然能夠進入細胞核。進一步研究揭示了野生型XRCC4能夠以雜合形式協(xié)助XRCC4A247S入核。接下來，我們著重研究了XRCC4A247S造成的功能學改變。彗星實驗和克隆形成實驗均提示XRCC4A247S造成XRCC4參與的DNA損傷修復能力明顯下降，并且野生型X

5、RCC4能夠逆轉(zhuǎn)XRCC4A247S放療敏感性。最后，我們通過染色體核型分析觀察到XRCC4A247S明顯增加細胞中異常染色體的數(shù)目（包括染色體斷裂、著絲點易位融合等），提示XRCC4A247S造成的DNA損傷修復缺陷導致受損遺傳物質(zhì)的累積并最終造成基因組的不穩(wěn)定，增加個體惡性腫瘤發(fā)生的風險。本研究從病例對照研究入手，在分子水平上解釋了rs3734091位點在隱性模型下具有潛在致病性的可能機制，提示XRCC4基因的遺傳變異能夠?qū)е聺h族女