人IL-12基因瘤內轉HCC-hu-PBL-NOD-SCID小鼠前后NK細胞功能的變化.pdf

1、目的：通過研究原發(fā)性肝癌及癌旁組織NK細胞活化性受體與抑制性受體表達情況，分析探討這兩種受體含量變化在原發(fā)性肝癌發(fā)生發(fā)展中的關系及其臨床價值；通過實驗研究白細胞介素12基因瘤內注射對肝癌荷瘤人HCC-hu-PBL-NOD/SCID小鼠微環(huán)境中NK細胞表達的變化，及其作用機理。
　　方法：1、流式細胞儀、免疫組化法檢測人原發(fā)性肝癌及癌旁組織NK細胞活化性受體與抑制性受體表達情況；2、NOD/SCID小鼠皮下注射HepG2細胞，成瘤后

2、腹腔注射人外周血淋巴細胞，構建人HCC-hu-PBL-NOD/SCID小鼠復合模型；隨機將模型小鼠分為四組，在第1、4、7天分別瘤內注射經致死量射線照射的轉染有人IL-12基因的肺癌細胞株9597/IL-12、空載體肺癌細胞株9597/plasmid、IL-12和PBS；觀測小鼠瘤體積的變化，以及小鼠體重、一般狀況的變化；3、ELISA檢測荷瘤小鼠微環(huán)境中IL-12、INF-γ水平；4、免疫組化法檢測荷瘤小鼠微環(huán)境中NK細胞受體前后變化

3、。
　　結果：1、原發(fā)性肝癌的NK細胞數量明顯低于癌旁對照組(P<0.01)，原發(fā)性肝癌組織活化性受體NKG2D、NKP44明顯低于癌旁組織(P<0.05)，而抑制性受體CD158b、CD159a明顯高于癌旁組織(P<0.05)。NKG2D、NKP30、NKP44的表達與肝癌臨床分期負相關，即在早中期的患者含量較高，越晚期患者肝癌組織中NKG2D、NKP30、NKP44含量越低（P<0.05）NK細胞中抑制性受體CD158b、CD

4、159a的含量在越晚期患者肝癌組織中含量越高（P<0.05）且與AFP高低有關及HBSAg的感染有聯(lián)系。而NK受體的表達在是否有遠處轉移、腫瘤分化程度之間以及不同的病灶大小之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；2、NOD/SCID小鼠皮下注射HepG2細胞并腹腔內注射人PBL后總體成瘤率100％，四組小鼠瘤體積以及小鼠體重、一般狀況變化不明顯；3、腫瘤微環(huán)境中，基因組、IL-12組小鼠IL-12、INF-γ水平高于空載體組和對照組；4、

5、免疫組化法檢測荷瘤小鼠瘤組織及脾臟前后NK細胞受體的變化：活化性受體NKG2D、NKP44、NKP30的表達較前升高，IL-12基因組和IL-12組治療前后有統(tǒng)計學意義；NKP46的表達未見明顯升高，治療前后無統(tǒng)計學意義；而抑制性受體CD158b、CD159a（NKG2A）表達受到抑制，治療前后有統(tǒng)計學意義。
　　結論：1、人原發(fā)性肝癌發(fā)病可能與NK細胞減低及NK細胞活化性受體表達降低、抑制性受體表達升高有關；2、人IL-12基因