1、抗腫瘤藥物海鞘多肽CS5931的表達(dá)及分離純化研究2、轉(zhuǎn)基因棉花治理土壤重金屬污染的研究.pdf

1、第一篇、抗腫瘤藥物海鞘多肽CS593的表達(dá)及分離純化研究
　　從薩氏海鞘(Cionasavignyi)中我們分離出了一種新型的具有抗腫瘤活性的多肽，即CS5931，其分子量為5931Da。實(shí)驗(yàn)表明，CS5931可以抑制多種癌細(xì)胞的生長，可以對人類肝癌細(xì)胞BEL-7402進(jìn)行誘導(dǎo)從而使癌細(xì)胞死亡。N-末端序列的分析結(jié)果表明，CS5931與人類顆粒體蛋白(granulin，GRN)具有同源性。早期利用分子生物學(xué)技術(shù)，實(shí)驗(yàn)室成功克隆了編

2、碼多肽CS5931全長cDNA序列，并因此獲得了CS5931的氨基酸序列，此外還通過基因工程技術(shù)對該氨基酸序列進(jìn)行了重組表達(dá)。本研究采用親和層析法，來獲得高純度的重組多肽CS5931，后期將對該重組多肽進(jìn)行分子機(jī)制及其抗腫瘤活性的研究。
　　我們在實(shí)驗(yàn)中將編碼多肽CS5931的基因片段連接到了表達(dá)載體pET21a(+)上從而構(gòu)建了表達(dá)載體pET21a(+)，并且通過將載體轉(zhuǎn)入到含有分子伴侶質(zhì)粒pG-KJE8的Origami(DE3

3、)中構(gòu)建了表達(dá)體系pET21a(+)-CS5931，我們對該表達(dá)體系進(jìn)行了誘導(dǎo)并得到了含硫氧還蛋白標(biāo)簽的表達(dá)產(chǎn)物重組多肽CS5931-His，且表達(dá)產(chǎn)物為可溶性蛋白。隨后經(jīng)變性純化、復(fù)性和蛋白酶酶切，我們得到了純度不小于95％的帶有His-tag的重組多肽CS5931-His。
　　重組多肽CS5931-His的His標(biāo)簽位于C-末端，在宿主菌種中的表達(dá)形式主要是可溶性形式表達(dá)。本課題表明，收集菌體裂解液上清液（含有可溶性表達(dá)蛋白

4、），在變性的條件下，經(jīng)鎳離子親和層析柱親和、用濃度為50 mM的咪唑洗去雜蛋白，并用濃度為500 mM的咪唑洗脫，三步即可獲得純化的重組多肽CS5931-His。
　　重組多肽CS5931-His對癌細(xì)胞生長的抑制作用通過MTT法進(jìn)行了評價。結(jié)果顯示，CS5931-His對人類宮頸腫瘤細(xì)胞Hela、人類結(jié)腸腫瘤細(xì)胞HCT116和RKO、人類白血病細(xì)胞HL60以及人類肺癌腫瘤細(xì)胞A549均有較不錯的增殖抑制作用。本課題對開發(fā)海洋多肽

5、類抗腫瘤新藥具有非常重要的價值，而且對建立Enolase1作為抗腫瘤藥物的新靶標(biāo)也具有重要的意義。
　　第二篇、轉(zhuǎn)基因棉花治理土壤重金屬污染的研究
　　2014年3月，民進(jìn)中央在在全國政協(xié)十二屆二次會議上提交了關(guān)于利用非食用作物修復(fù)重金屬污染土壤的提案，提案中指出，針對現(xiàn)在我國土壤重金屬污染越來越嚴(yán)重的問題，可以利用非食用經(jīng)濟(jì)作物，如苧麻、棉花等，工業(yè)用油料作物如海甘藍(lán)、蓖麻等，以及其它非食用作物，通過吸收并富集作用將重金屬

6、移出土壤，從而達(dá)到污染治理與生態(tài)恢復(fù)的目的，這一提案在修復(fù)效果和經(jīng)濟(jì)效益方面都具有優(yōu)勢明顯，并且同時兼有經(jīng)濟(jì)效益和環(huán)境效益，易于被接受和推廣。
　　棉花是世界上最主要的農(nóng)作物之一，其產(chǎn)量大而且生產(chǎn)成本低，我國的棉花種植面積基本在500萬公頃左右（約合7500萬畝），棉花的產(chǎn)量在700萬噸左右。長江流域、黃河流域和西北內(nèi)陸棉區(qū)是我國三大棉區(qū)，具體包括冀、魯、豫、陜、晉、津、蘇、皖、湘、鄂、贛、新、甘等13個省區(qū)。因此，我們選用棉花處

7、理土壤重金屬污染具有極大的便利性和可行性。
　　本實(shí)驗(yàn)將來自香港大學(xué)的ACBP1基因轉(zhuǎn)化至農(nóng)桿菌LBA4404中，然后利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將該基因轉(zhuǎn)入棉花。使棉花的抗重金屬能力大大增強(qiáng)，從而起到治理重金屬污染的土壤。
　　實(shí)驗(yàn)主要探究了農(nóng)桿菌介導(dǎo)方法以及棉花再生體系的建立。實(shí)驗(yàn)選取“石抗434”“大德”“石雜101”三種棉花，最終選定以“石抗”的下胚軸作為基因轉(zhuǎn)化的受體，對愈傷組織培養(yǎng)條件優(yōu)化，篩選出胚性愈傷組織出愈率高的條件，