柄海鞘（Styela clava）生物堿類物質(zhì)的分離純化及抗腫瘤活性研究.pdf

1、目前，國外對海洋被囊動物海鞘類生理活性物質(zhì)的研究正處于高速發(fā)展階段，但是關(guān)于從柄海鞘的鞘囊或鞘體中提取出高效的抗腫瘤藥物的研究至今尚未見報(bào)道。國內(nèi)學(xué)者對海鞘的研究僅有零星報(bào)道，多數(shù)未涉及到生理活性問題。我國海鞘資源豐富，種類多分布廣，山東沿海柄海鞘資源極為豐富，與國外相比，國內(nèi)海鞘資源不僅沒有得到有效的開發(fā)，而且困擾著漁業(yè)和航海業(yè)的發(fā)展，應(yīng)當(dāng)引起人們的極大關(guān)注。本文從以下幾方面對柄海鞘鞘體內(nèi)生物堿進(jìn)行了初步研究。 首先，將采集到

2、的新鮮柄海鞘冷凍保存，解凍后剝離鞘囊，將鞘體組織勻漿，冷凍干燥，將鞘體粉末用氨水濕潤，氯仿浸提，濃縮氯仿浸提液，用鹽酸酸化后乙醚萃取除掉脂溶性雜質(zhì)，氫氧化鈉堿化后用氯仿重新萃取，得到橙黃色的氯仿萃取液，濃縮蒸干得到脂溶性總生物堿。用10％氨水浸提鞘體殘?jiān)?，鹽酸酸化后，離心棄沉淀，向酸化溶液中加入飽和雷氏銨鹽溶液，離心棄上清，丙酮溶解雷氏生物堿復(fù)鹽沉淀，水洗重新沉淀。丙酮溶解沉淀后過732強(qiáng)酸H型陽離子交換樹脂，10％氨水洗脫，濃縮蒸干洗

3、脫液，鹽酸酸化后過SephadexLH-20凝膠柱層析，收集合并各組分。用半制備HPLC、結(jié)晶和重結(jié)晶、SephadexLH-20，得到物質(zhì)B-a、C-a、E-a。其次，對分離到的B-a用EI源質(zhì)譜分析測試，由于尚含有雜質(zhì)，無法確定B-a的具體結(jié)構(gòu)；結(jié)合C-a的ESI源質(zhì)譜、紅外和X-單晶衍射，確定C-a為甜菜堿的鹽酸鹽；組分E-a使用HPLC、全波長掃描和熒光掃描對E-a進(jìn)行了定性，基本確定E-a為1，2-雙(5-甲基-2-苯并噁唑)

4、-乙烯。對提取的脂溶性總生物堿(Lt)用薄層層析和HPLC進(jìn)行了成分分析，確定脂溶性總生物堿(Lt)為成分復(fù)雜的混合物。 最后，利用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，對B-a、C-a、E-a、Lt進(jìn)行抗腫瘤活性篩選，結(jié)果表明，B-a、C-a、E-a三種物質(zhì)在10～80μg/mL濃度下對MCF7乳腺癌細(xì)胞和HepG2肝癌細(xì)胞48h內(nèi)均沒有表現(xiàn)出明顯的抑制作用。Lt對MCF7乳腺癌和HepG2肝癌細(xì)胞作用24h和48h，在各濃度下表現(xiàn)出抑制作用，特別在