11938.海燕內臟腦苷脂的分離純化及抗腫瘤活性研究

1、分類號分類號密級UDC編號碩士學位論文海燕內臟腦苷脂的分離純化及抗腫瘤活性研究左海嬌（1132020）指導教師姓名李智博副教授專業(yè)名稱食品科學論文答辯日期2014年5月31日學位授予日期2014年6月摘要I摘要在我國，海星綱種類繁多，資源豐富，其繁殖和適應能力很強，但其食用價值不高，同時是養(yǎng)殖貝類的天敵。海燕是海星綱的一種，其體內含有很多具有生物活性的物質，成為研究的熱點。腦苷脂是海燕內臟中一種活性很強的內源性物質，具有調控細胞生長、抗

2、腫瘤、抗菌、抗病毒、抗?jié)?、免疫調節(jié)、神經保護等作用。目前，對腦苷脂的抗腫瘤活性研究已成為國際主流，有望開發(fā)成為輔助治療腫瘤疾病的新藥。本文以海燕內臟為原料，采用有機溶劑浸提的方法提取腦苷脂，利用硅膠層析法結合薄層層析法對腦苷脂進行分離純化，對分離純化后的腦苷脂進行結構鑒定，以純化后的腦苷脂為標準品利用高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測法對其提取工藝進行優(yōu)化，并研究其抗腫瘤活性。得到的主要研究結果如下：1、對海燕內臟干粉采用95%乙醇室溫下浸提

3、，通過薄層層析法(TCL)鑒定得到腦苷脂粗品，再通過硅膠層析多次對粗腦苷脂進行分離純化，根據(jù)TCL顯示結果確定腦苷脂得到純化。2、采用紅外光譜分析對分離純化后得到的腦苷脂進行結構分析，得到所提取出的腦苷脂含有如下結構：CH、表明酰胺鍵的C=O和NH、CO、CH2以及長脂肪鏈。通過高分辨質譜分析，得到可能的相對分子質量為790.6439804.6601和818.6752，與之對應的分子式為C44H87O10N，C45H89O10N和C46

4、H91O10N。3、通過單因素和正交實驗優(yōu)化海燕內臟中提取腦苷脂的條件，結果表明，最佳的提取條件為：室溫下，正己烷與乙醇混合比例為2:1(VV)，料液比為1:20(WV)，提取時間為3天，提取次數(shù)為2次，此條件下腦苷脂的相對提取率可達到87.67%。4、對分離得到的腦苷脂進行體外抗腫瘤活性實驗，MTT結果表明，在劑量為10~400μgml范圍內，腦苷脂可抑制人肝癌細胞(BEL7402)、人宮頸癌細胞(HeLa)和人乳腺癌細胞(MCF7)

5、的生長，基本具有時間、劑量的依賴性。人乳腺癌細胞(MCF7)培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)的檢測結果與MTT結果基本保持一致，腦苷脂劑量越大，細胞LDH漏出越多，LDH活性越高，說明腦苷脂破壞了MCF7細胞的細胞膜，使其通透性增加。5、從細胞凋亡的角度研究了腦苷脂的抗腫瘤作用機理。通過細胞形態(tài)學觀察（倒置顯微鏡和熒光染色觀察）可以看出，腦苷脂可以使MCF7細胞的細胞數(shù)量減少，細胞形狀變圓，細胞折光度下降，同時伴隨有染色質固縮、細胞核呈致密