廣西尖吻蝮蛇毒抗腫瘤組分的分離純化及活性的研究.pdf

1、目的：從廣西尖吻蝮蛇毒中分離純化一種小分子多肽(K組分)，研究其對(duì)癌細(xì)胞株的誘導(dǎo)凋亡作用及其他抗腫瘤相關(guān)機(jī)制。方法：經(jīng)Sephadex G-75凝膠過濾，超濾和DEAE Sepharose CL-6B離子交換層析法從廣西尖吻蝮蛇毒中分離純化獲得一種小分子多肽，采用SDS-PAGE鑒定純度并測(cè)定分子量；采用MTT法和平板集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其對(duì)癌細(xì)胞株的生長(zhǎng)抑制情況；應(yīng)用H.E染色和透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變，AO-EB雙熒光染色和流式細(xì)胞

2、術(shù)(FCM)檢測(cè)調(diào)亡的發(fā)生；PI單染流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)K組分對(duì)細(xì)胞周期的影響；通過細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)腫瘤細(xì)胞黏附能力的影響；觀察K組分對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞株的生長(zhǎng)抑制和黏附抑制作用，并建立雞胚尿囊模型觀察其抗血管生成的活性。結(jié)果：從廣西尖吻蝮蛇毒中分離純化出的具有抗腫瘤活性的小分子多肽，SDS-PAGE鑒定其為單一組分，分子量為7862D左右。該組分對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖有不同程度的抑制，對(duì)人卵巢癌細(xì)胞株A2780作用12、24、48h的半數(shù)抑制

3、濃度(ICso)分別為1.36 μg/ml、0.814 μg/ml、0.566 μg/ml；對(duì)人胃癌細(xì)胞株SGC-7901作用12、24、48h的半數(shù)抑制濃度分別為8.38 μg/ml、3.21 μg/ml、1.38 μg/ml。當(dāng)劑量在0.2～1.2 μg/ml時(shí)，對(duì)A2780的集落形成抑制率從24～87％，有明顯的量-效關(guān)系。普通光學(xué)顯微鏡和透射電鏡下觀察到1.00 μg/ml的藥物作用24h后的A2780細(xì)胞呈典型的凋亡形態(tài)學(xué)特征

4、：細(xì)胞變小，細(xì)胞質(zhì)濃縮，染色質(zhì)邊集碎裂，胞漿內(nèi)出現(xiàn)空泡，細(xì)胞膜完整等；AO-EB熒光雙染色也發(fā)現(xiàn)0.8 μg/ml的K組分處理48h后，有大量染色質(zhì)濃染碎裂呈橙色熒光的凋亡細(xì)胞出現(xiàn)，F(xiàn)CM檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，處理組細(xì)胞的早期凋亡率均顯著高于對(duì)照組，濃度為0.8 μg/ml時(shí)，早期凋亡率達(dá)到高峰，在這之后，晚期凋亡和壞死細(xì)胞比例顯著增加，早期凋亡細(xì)胞的存在不明顯。K組分能將A2780的細(xì)胞周期阻滯在G2/M期；能夠劑量依賴性地抑制細(xì)胞同纖維連接蛋白