尖吻蝮蛇毒抗血小板聚集組分的分離純化及其活性測(cè)定.pdf

1、血小板是血液中最小的、具有多種功能的細(xì)胞，它在血栓形成、動(dòng)脈粥樣硬化等病理過(guò)程中扮演了重要的角色。蛇毒中廣泛存在抑制血小板聚集的活性組分，它們的生化特性及作用機(jī)理均不盡相同。近年來(lái)，已有文獻(xiàn)報(bào)道了從不同的種屬的蛇毒，特別是從蝰科蝮亞科毒蛇所分泌的蛇毒中提取及分離出多種血小板聚集抑制劑，并對(duì)它們的活性進(jìn)行了分析。關(guān)于尖吻蝮蛇毒這方面的研究較少，本課題擬從尖吻蝮蛇蛇毒(Agkistrodon acutus venom，AAV)中分離純化出具

2、有的抗血小板聚集作用組分，測(cè)定其理化性質(zhì)，觀察其體內(nèi)外抗血小板聚集活性，為進(jìn)一步研究開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 1.抗血小板聚集組分的分離純化 應(yīng)用Superdex75凝膠過(guò)濾色譜，從尖吻蝮蛇粗毒中分離得到6個(gè)蛋白峰；其中蛋白峰Ⅳ抑制二磷酸腺苷(ADP)誘導(dǎo)的血小板聚集活性最強(qiáng)，該組分再經(jīng)Sephadex G-25凝膠色譜、DEAE Sepharose Fast Flow離子交換色譜和Lichrospher C18反相色譜等純化

3、得一個(gè)電泳純蛋白組分，暫定名為AAV-IV3-2。SDS-PAGE蛋白電泳鑒定發(fā)現(xiàn)，AAV-IV3-2呈單一條蛋白區(qū)帶。 2.AAV-IV3-2部分理化性質(zhì)測(cè)定 根據(jù)AAV-IV3-2和Marker在凝膠上的相對(duì)位置，利用Image Master VDS凝膠成像系統(tǒng)中的軟件計(jì)算得出AAV-IV3-2的分子量大約為15.3kDa。 3.AAV-IV3-2對(duì)血小板聚集的影響 采用經(jīng)典的Born法，發(fā)現(xiàn)AAV-

4、IV3-2在體外可抑制ADP和凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集，且該作用呈明顯的量效關(guān)系，AAV-IV3-2對(duì)ADP、凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集的IC50分別為1.78μg/ml和5.06μg/ml。 4、AAV-IV3-2對(duì)ADP-Na誘導(dǎo)的小鼠急性肺栓塞的影響 采用ADP-Na誘導(dǎo)的小鼠急性肺栓塞模型發(fā)現(xiàn)，AAV-IV3-2 iv可以明顯縮短小鼠呼吸窘迫時(shí)間，中高劑量組(150、200μg/kg)小鼠恢復(fù)正常呼吸、自主活動(dòng)的時(shí)間(