納豆菌胞內(nèi)抗氧化活性物質(zhì)的分離純化及其抗腫瘤活性的研究.pdf

1、在正常生命過程中自由基是維持生命所必需的，但自由基也是生物大分子、細(xì)胞和生物組織的危險(xiǎn)殺手。目前研究結(jié)果揭示的證據(jù)表明，自由基幾乎和人類常見的幾種主要疾病都有一定的關(guān)系。其中自由基參與癌變的機(jī)理，也己為人們所公認(rèn)。在癌癥形成三個(gè)階段中，推測都有高度活潑性的自由基參與。因此從抗氧化、清除自由基的角度抑制腫瘤的發(fā)生和發(fā)展越來越受到重視。
　　 納豆菌及其代謝產(chǎn)物具有多種生理功能，包括溶血栓、降血壓、抗氧化、抗致病菌等。本文以納豆菌為

2、研究對象，圍繞其細(xì)胞內(nèi)的抗氧化活性物質(zhì)的分離純化及其抗腫瘤活性進(jìn)行研究。
　　 首先對納豆菌菌體進(jìn)行超聲破碎，收集上清，并利用大孔樹脂、凝膠層析等手段分離到具有顯著抗氧化活性的小分子肽復(fù)合物，并通過薄層層析、高效液相色譜確定其主要組成為Trp、Tyr、Val、Pro和Lys。
　　 在此基礎(chǔ)上，對其抗腫瘤活性進(jìn)行研究。通過比較造模劑二甲基苯蒽(DMBA)和甲基亞硝基脲(MNU)，確定以甲基亞硝基脲(MNU)誘導(dǎo)乳腺癌大鼠

3、，作為體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的乳腺癌動(dòng)物模型。進(jìn)一步通過給藥組和對照組的比較，測定抗氧化小肽復(fù)合物的體內(nèi)抗腫瘤作用與毒副作用程度。結(jié)果顯示該小肽復(fù)合物具有一定抑制腫瘤的作用，并對肝臟、腎臟的毒性顯著低于抗腫瘤藥物順鉑(cisplatin，DDP)，并且平均體重和生存率也有一定程度的提高。通過實(shí)時(shí)定量PCRΔΔCt法對給藥組和對照組乳腺癌動(dòng)物模型的超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase，SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathion

4、e Peroxidase，GPx)基因的表達(dá)水平進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)SOD基因、GPx基因的表達(dá)水平都有很大程度的提高。
　　 本論文從納豆菌細(xì)胞內(nèi)分離到具有顯著抗氧化活性的小分子肽復(fù)合物，并發(fā)現(xiàn)該小肽復(fù)合物在對肝、腎毒副作用較低的情況下，具有一定抑制腫瘤的作用。且該小肽復(fù)合物能顯著提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抗氧化酶基因表達(dá)水平，在發(fā)揮抑制腫瘤作用的同時(shí)，提高機(jī)體抗氧化能力、緩解抗腫瘤藥物順鉑的毒副作用，為納豆菌代謝產(chǎn)物的應(yīng)用奠定了堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)