植物內(nèi)生真菌抗腫瘤活性物質(zhì)的研究.pdf

1、廈門大學(xué)博士學(xué)位論文植物內(nèi)生真菌抗腫瘤活性物質(zhì)的研究姓名：王建鋒申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：動(dòng)物學(xué)指導(dǎo)教師：蘇文金2001.8.2E建鋒博士論文摘要很強(qiáng)的細(xì)胞毒作用，將其發(fā)酵液用乙酸乙酯抽提濃縮后，用甲醇、丙酮等溶劑反復(fù)重結(jié)晶，即可得到無(wú)色純凈的柱狀晶體。采用XRay單晶衍射、IR以及NMR等手段確定了該晶體的是一種大環(huán)內(nèi)酯類物質(zhì)一一布雷菲德菌素A(BrefeldinA，BFA)。本文工作證實(shí)了南方紅豆杉、香榧和三尖杉中存在著豐富的植物內(nèi)生

2、真菌資源，種屬多樣。抗腫瘤活性菌株WTF5除了產(chǎn)生紫杉醇外，還可產(chǎn)生CytD，經(jīng)鑒定為一種瘤座孢(Tuberculariasp)，這是首次從紅豆杉類植物中分離到瘤座孢屬真菌，是一株紫杉醇和松胞菌素新的產(chǎn)生菌。H036可產(chǎn)生BFA(產(chǎn)量≥100mg／L發(fā)酵液)，經(jīng)鑒定為一種擬青霉(Paecilomycessp)，是一株布雷菲德菌素新的產(chǎn)生菌。這些結(jié)果表明藥用植物內(nèi)生真菌是研究和開(kāi)發(fā)抗腫瘤微生物藥物的寶貴資源。本文還對(duì)分離到的CytD和BF

3、A對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用作了初步的探討。采用MTT和貼壁集落等方法檢測(cè)了CytD和BFA對(duì)HL60、KB等腫瘤細(xì)胞的抑制作用，并采用流式細(xì)胞檢測(cè)法和激光共聚焦掃描形態(tài)觀察法研究了CytD和BFA誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。結(jié)果表明，CytD對(duì)HL60、KB、Hela、MCF7和SpcA一1細(xì)胞的ICso分別為250、250、250、500、100ng／ml；BFA的細(xì)胞毒作用要比CytD強(qiáng)，對(duì)這些細(xì)胞的IC50分別為15、10、30、25、20ng／

4、ml。CytD能夠誘導(dǎo)HL60和KB細(xì)胞G2／M期阻滯和細(xì)胞凋亡；經(jīng)CytD處理的KB細(xì)胞在6h內(nèi)就出現(xiàn)起泡現(xiàn)象(Cellblebbing)，在24h后G2，M期阻滯到達(dá)最高峰(18％上升到40％)，48h后Bcl2的表達(dá)明顯下降，大量細(xì)胞凋亡(48％上升到55％)。提示微絲系統(tǒng)對(duì)細(xì)胞信號(hào)的傳導(dǎo)具有重要作用，對(duì)微絲的破壞，可能會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。BFA能夠誘導(dǎo)HL60及KB細(xì)胞的G0，G1期阻滯和細(xì)胞凋亡。BFA處理KB細(xì)胞24h后，細(xì)胞不