藥用植物蕎麥內(nèi)生真菌的分離鑒定及其抗菌抗腫瘤活性研究.pdf

1、植物內(nèi)生真菌是指在其整個生活史或者生活史的某一階段生活在植物組織體內(nèi)的一類并不引起明顯病害癥狀的真菌。它們有著豐富多樣的具有重要生物學活性的代謝產(chǎn)物，從植物中分離獲得能夠產(chǎn)生活性物質(zhì)的內(nèi)生真菌菌株有著重要的意義，同時也是目前微生物藥物研發(fā)的一個熱點。
　　 金蕎麥(Fagopyrum dibotrys)和苦蕎麥(Fagopyrum tataricum)都是蓼科(Polygonaceae)蕎麥屬(Fagopyrum)植物，研究表明

2、金蕎苦蕎植物提取物有抑菌、抗腫瘤、抗氧化、降血糖、降血脂等藥理活性。目前我國對蕎麥的研究多集中在植物化學成分分析，尚未見到對其內(nèi)生真菌的研究報道。
　　 本研究從金蕎麥和苦蕎麥的根、莖、葉、花中分離到62株內(nèi)生真菌，采用K-B紙片法和細胞毒篩選模型(MTT法)分別對這些內(nèi)生真菌發(fā)酵液的抗菌和抗腫瘤活性進行了測定。結(jié)果表明，有三株內(nèi)生真菌的發(fā)酵液對大腸桿菌、黃瓜枯萎病菌等和人肝癌細胞株HepG2細胞生長有明顯的抑制作用。對分離自苦

3、蕎花的內(nèi)生真菌KQH-01和KQH-02的醇提物誘導HepG2細胞凋亡進行了熒光染色、DNAladder和流式細胞(FCM)分析顯示，內(nèi)生真菌KQH-01和KQH-02次生代謝醇提物能誘導HepG2細胞凋亡。
　　 以ITS1和ITS4為引物，對活性菌株KQH-01、KQH-02和JQY-1的ITS序列進行了PCR擴增，并對擴增產(chǎn)物進行了測序，序列比對分析發(fā)現(xiàn)KQH-02為毛殼屬(Chaetomium sp.)的球毛殼菌；JQY

4、-1為葡萄座腔菌Botryosphaeria sp.)；而KQH-01的ITS序列與數(shù)據(jù)庫中已知種類序列的同源性僅為94％，所以KQH-01可能是炭角菌屬的一個新種或亞種，該序列已在GenBank中登錄(Accession No.：FJ170815)。
　　 對抑菌和抗腫瘤活性較高的KQH-02的次生代謝產(chǎn)物成分進行了初步的分析，GC-MS分析結(jié)果表明其乙醇提取物的甲醇提取成分主要有正十六酸(n-hexadecanoic aci